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Western blot
提供各种样品的Westernblot蛋白检测服务,同时欢迎客户带样品参观、参与实验。
服务类别:免疫与抗体总访问:1968
最后更新:2012-10-30半年访问:69
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提供全套免疫印迹服务。
1. 蛋白质抽提
a.实验对象为组织样品,取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂),匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白)。
b.
实验对象为细胞样品,每份样品取1×106~1×107细胞,PBS清洗细胞,去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)抽提总蛋白(或核蛋白)。 
2.蛋白质定量
 
用经典的Bradford法测定样品浓度。
3. 
免疫印迹实验
客户方需提供:
1.
第一抗体(建议客户定购国外公司的一抗,以国外文献中报导的抗体为佳,如CST、ABcam、 Zymed等著名抗体公司)
2.
预实验样本
3.正式实验样本
同时希望客户能提供相应的背景材料以利实验顺利完成,背景材料包括:样本描述,目的蛋白相关资料,必要的相关实验设计内容如阳性对照等等。
服务流程:

 
预实验:
如样本数目比较大、或样本量稀少比较珍贵时建议做预实验,以检测抗体质量和客户的样本情况。由于抗体的质量对于实验的成败至关重要,建议选用有质量保证的品牌抗体。
具体流程如下:
1.客户样本做蛋白含量测定,确定合适的上样量。
客户提供的样本若干2-3个做对照基因β-actin检测,如此步结果正常,进入目标基因测试。
2.根据客户提供的一抗和客户提供的样本做目标基因测试,确定抗体的合适用量摸定反应条件,一抗用量选用说明书推荐的上限偏高(最浓的)浓度如说明书推荐一抗稀释度在1:200,到1:20000之间,则我们初次实验选用1:100,如实验没有信号,再次确认后通知客户换抗体,如结果有目标信号则再根据结果摸定合适的反应条件,进行正式实验。
 
正式实验:
根据预实验摸定的反应条件,逐步分阶段进行正式实验,同时随时通知客户反应进程,调整实验。
 
服务方提供:蛋白显色图谱。
验收标准:蛋白显色图谱,条带清晰,对照基因基本一致。
 
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