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transwell细胞迁移1000元/张
提供transwell细胞迁移技术服务, 细胞共培养/趋化实验/肿瘤迁移实验,电话:13661449330,宋老师。
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最后更新:2013-8-9半年访问:55
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     transwell 细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究的细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

一、肿瘤细胞侵袭实验(transwell)
原理:
模仿体内细胞外基质,细胞只有分泌基质金属蛋白酶(MMPs),降解基质胶才可进入下室。
 
步骤
1.  Transwell小室准备
1)无基质胶Transwell小室制备
A. 包被基底膜:
A. Matrigel (50mg/L)按1:8稀释,无血清培养基作为稀释液
B. 取适量加入Transwell小室中(24孔板transwell小室加100 ul),4℃操作。
C. 37℃培养箱中,孵育4-5h(>5h);出现“白色层”时,说明已经变为固态。
 
2)有基质胶Transwell小室制备
A. 小室放入培养板中,上室加入300µl预温的无血清培养基
B. 室温下静置15-30min,使基质胶再水化
C. 再吸去剩余培养液。
二、肿瘤细胞迁移实验(Transwell)
过程与Transwell侵袭实验基本一致,不同的只是不需要铺Matrigel。
步骤
1.Transwell放入预先每孔加有600ul的培养基(含10%血清)的24孔板内,
2.在Transwell的内室加入细胞(100ul,用含0.1%血清的培养基稀释到所需密度),
3.放入细胞培养箱,培养一定时间后取出。
4.取出Transwell,用棉签擦去膜(内室一侧)的细胞
5.另一面的细胞用甲醛室温固定30分钟
6. 结晶紫染色20分钟,
7. PBS或清水洗3次,
8.显微镜下观察细胞,记数。

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