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磷酸化抗体制备服务--周期短，服务周到，欢迎咨询！
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| 服务商： 亚太恒信生物科技(北京)有限公司 | 查看该公司所有服务 >> |
磷酸化兔多克隆抗体制备服务（￥12000/项目）
合成1条磷酸化多肽和1条完全一样的非磷酸化多肽
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磷酸化多肽偶联KLH
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空白血抗原ELISA检测挑选低背景大白兔
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KLH+磷酸化多肽免疫新西兰大白兔2只
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100μg/只白兔免疫三次以上，采集血清
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Protein G纯化收集血清中总IgG
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磷酸化多肽偶联纯化填料亲和总IgG，洗脱得到目的IgG
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目的IgG穿非磷酸化多肽偶联的填料
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收集洗脱液（含有最终的抗磷酸化多肽IgG），进行浓缩，透析|
磷酸化小鼠单克隆抗体制备（￥36000/项目）
合成1条磷酸化多肽和1条完全一样的非磷酸化多肽
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磷酸化多肽偶联KLH
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免疫5只Bablc小鼠，免疫量50ug/只,最终达到融合效价>1:10000
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融合前3-5天，无佐剂50ug/只，加强免疫效价最高的小鼠
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取脾脏分离成单细胞与对数期的SP2/0按5：1混合，进行细胞融合，20%胎牛血清，HAT选择培养基，铺10块96孔板
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偶联BSA+磷酸化多肽、BSA+非磷酸化多肽
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融合后7天，ELISA检测96孔板上清。包被ELISA板(BSA+磷酸化多肽作为阳性，BSA+非磷酸多肽作为阴性)。
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阴性（正常培养基）OD<0.1，阳性OD>0.5视为磷酸化多肽阳性孔
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挑选OD值高的阳性细胞孔，进行后续亚克隆，直到含有细胞的所有孔均为阳性
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亚克隆后的阳性孔进行扩大培养
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扩大培养上清，按客户要求进行功能检测（WB/ELISA/IHC），满足客户要求后，将应客户要求交付细胞（每株细胞2管）
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客户指定细胞株生产10mL腹水
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磷酸化多肽偶联KLH
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免疫5只Bablc小鼠，免疫量50ug/只,最终达到融合效价>1:10000
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融合前3-5天，无佐剂50ug/只，加强免疫效价最高的小鼠
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取脾脏分离成单细胞与对数期的SP2/0按5：1混合，进行细胞融合，20%胎牛血清，HAT选择培养基，铺10块96孔板
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偶联BSA+磷酸化多肽、BSA+非磷酸化多肽
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融合后7天，ELISA检测96孔板上清。包被ELISA板(BSA+磷酸化多肽作为阳性，BSA+非磷酸多肽作为阴性)。
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阴性（正常培养基）OD<0.1，阳性OD>0.5视为磷酸化多肽阳性孔
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挑选OD值高的阳性细胞孔，进行后续亚克隆，直到含有细胞的所有孔均为阳性
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亚克隆后的阳性孔进行扩大培养
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扩大培养上清，按客户要求进行功能检测（WB/ELISA/IHC），满足客户要求后，将应客户要求交付细胞（每株细胞2管）
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客户指定细胞株生产10mL腹水
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