小鼠MOG35-55肽段EAE模型机制解析

关键词：MOG肽段，MHC II递呈，EAE模型

[导语]  重组小鼠mog蛋白在关键词表里被归到蛋白一类，实际收到的是一小管合成肽：序列取自 MOG 的第 35 到 55 位，共 21 个氨基酸。它不折叠、不带糖链，进入体内之后靠的是被 MHC II 分子递呈。把这个前提想清楚，后面的溶解、乳化与评分才有落脚点。

一、重组小鼠mog蛋白为什么是一段肽，而不是整条蛋白？

MOG 是髓鞘少突胶质细胞表面的糖蛋白，朝向细胞外的是一个 IgV 样结构域，跨膜段把它锚在膜上，胞内还留着一小段尾巴。整条蛋白做出来要过表达、折叠、糖基化几道关，批间差异也压在这一段上。

把免疫识别的落点单独拎出来，就得到了肽。35 到 55 这一段位于胞外域之内，是小鼠体系里被反复验证的免疫显性表位。它不需要模拟天然构象，因为 T 细胞读的从来不是天然构象。

图1 MOG 全长结构上，35–55 肽段位于胞外 IgV 样域内，
跨膜段与胞内段不参与这段肽的免疫识别

二、21 个氨基酸的长度，为什么刚好够被递呈？

MHC II 的肽结合沟槽两端是开口的，装进去的肽长度可以浮动，常见区间落在 13 到 25 个氨基酸。比这更短，锚定不稳；比这更长，两端会露在沟槽外面。

21 个氨基酸正好处在这个区间的中段。对小鼠 H-2b 单倍型来说，这段序列里有几个位点负责插进沟槽的锚定口袋，其余位点朝向 T 细胞受体一侧，决定它认不认。所谓免疫显性，说的就是这几处朝向决定了应答的走向。

三、肽段被读的是序列，不是形状，这句话怎么理解？

抗体认构象，T 细胞认复合物。前者看的是分子表面的形状与电荷分布，蛋白一变性，结合就掉了；后者看的是 MHC 分子把肽端出来的那个组合，肽只要序列对、能嵌进沟槽，就能被认出来。

这条差别解释了两件事：肽段不怕变性，也做不出构象抗体的筛选。用肽去免疫动物拿到的抗体，多半认线性表位；要拿构象抗体，还得回到重组蛋白那一侧。

图2 肽段经内体加工后装进 MHC II 沟槽，T 细胞受体识别的是 MHC 与肽的组合，而非天然蛋白表面

四、MHC II 这条递交链怎么走？

抗原递呈细胞把肽吞进去，内体酸化之后把载体蛋白切碎，MHC II 的沟槽先被一段叫 CLIP 的短片段占着，随后在 HLA-DM 的帮助下换成抗原肽，复合物再被运到细胞表面。

整个过程不需要肽段自己折叠，只需要它能在切割产物里保留下来，并且对沟槽有足够亲和力。有些序列在溶酶体里被切得太碎，递呈效率就低，这也是同一段蛋白里不同肽段免疫原性强弱差别很大的原因。

五、为什么 C57BL/6 小鼠是这套体系的常用背景？

肽段要起作用，得先和宿主的 MHC 分子对得上。C57BL/6 是 H-2b 单倍型，35 到 55 这一段在它体内递呈效率高，诱导出来的应答以 CD4 阳性的 Th1 与 Th17 为主。

换个品系，同一段肽可能递呈不上，症状起不来。有人把造模失败归到肽的质量上，回头一查是动物背景不对。选品系这一步，和选肽同样关键。

六、读完免疫应答，看哪些信号？

临床评分是最直观的一条，尾部张力与后肢力量按量表逐日打分；体重变化是第二条，往往比评分早一两天出现；取材之后看脊髓与脑的炎症浸润，把主观打分落到客观计数上。

细胞层面还有两条：脾细胞或淋巴结细胞加肽再刺激，读增殖与 IFN-γ、IL-17 的分泌；用同一段肽装配的四聚体，可以直接数出抗原特异性 T 细胞的比例。前者回答细胞有没有被激活，后者回答有多少细胞认这段序列。

七、关于这段肽的三个常见疑问
Q：它为什么跑不出常规 SDS-PAGE 的条带？

A：21 个氨基酸的肽分子量在两千多道尔顿量级，低于常规凝胶的分辨下限，跑胶时要么跑出胶外，要么与染料前沿混在一起。质量凭证通常靠反相色谱纯度与序列确认。

Q：肽段需要和佐剂一起用吗？

A：需要。游离肽在体内半衰期短，单独注射很难形成持续刺激。完全弗氏佐剂把它包在油相里缓释，免疫刺激才拉得起来。

Q：同一段序列，为什么不同批次的造模表现会有差别？

A：合成纯度、盐型与溶解状态都会影响有效剂量。换批之前先用小样跑一次，比直接放大更稳妥。

八、结语

把它当成一段序列而不是一个完整蛋白，很多疑问就顺了：为什么它跑不了常规凝胶，为什么它不怕构象变化，为什么换品系就失效。序列就是它的全部内容，其余都是围绕这段序列做的安排。

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