解决原代制备痛点：小鼠肠道组织解离试剂盒科研实操详解

  一、标准化酶解解离和传统制备法有哪些区别？

  本试剂盒采用复合酶协同温和解离方案，区别于传统机械研磨、单一胰酶消化法。机械解离依靠物理剪切破碎组织，细胞破损多、活率偏低，极易破坏免疫细胞表面抗原；单一胰酶消化酶活剧烈，易过度水解细胞膜蛋白，丢失细胞标志物。试剂盒由 A 洗液、B 洗液、C 复合解离液组成，分步去除肠上皮、脂肪杂质后，复合酶靶向降解固有层间质结缔组织，温和释放单细胞，最大程度保全细胞表面抗原，最终细胞活率可达 90% 以上。

  二、试剂盒组分各自承担什么实验功能？

  试剂盒分 3 种定型试剂，适配 10T/25T 两种规格，储存条件差异化：

• A 洗液（4℃保存）用于初步洗脱肠道黏液与肠上皮细胞；
• B 洗液（4℃保存）二次清洗残留上皮碎片与脂肪组织；
• C 组织解离液（-20℃分装避光，避免反复冻融）为复合酶混合液，37℃恒温消化90min裂解固有层结缔组织，释放单细胞悬液。

  整套试剂配套标准化操作流程，省去自行配制缓冲液与复合酶的繁琐步骤，提升实验重复性。

  三、哪些科研实验依赖该试剂盒制备细胞样本？

  该试剂盒制备的高活性单细胞是肠道科研的基础样本，主要应用四类实验：

• ①流式细胞分型，检测肠道 Treg、巨噬细胞、先天淋巴样细胞亚群比例，细胞表面标志物完整可正常染色；
• ②单细胞 RNA 测序，高活率细胞满足测序质控，解析肠道细胞异质性；
• ③原代细胞体外培养，用于肠道炎症、屏障功能、药物体外筛选实验；
• ④肠道病理机制研究，构建肠炎动物模型后分析固有层细胞功能变化。

  样本经 70μm 筛过滤、400g 离心即可获得纯化细胞悬液。

  四、试剂盒实操与保存有哪些关键注意事项？

  试剂 C 需分装冻存避免反复冻融，使用前室温解冻混匀；组织全程无菌操作，如需原代培养需无菌环境取材；小鼠小肠剔除派氏结、脂肪组织后分段处理，消化严格控制 90min；产品仅限科研使用，不可用于临床体外诊断。