原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法

 

原理：

    苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度，如果染料与含有脂类的试样接触，便有大量染料进入脂类物质的结构内，使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色，使脂质呈色。也可用四氧化锇染色，脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。

 

配制试剂：

1.苏丹红Ⅲ染色液：将1g苏丹红Ⅲ溶于加温的70%乙醇溶液中过滤备用；

2.甲醛钙固定液：将10ml甲醛和1g CaCl₂混合加水至100ml；

3.甘油明胶：将12g明胶加入120ml蒸馏水中水浴加热使其完全溶解，再加入60ml甘油和1g苯酚，充分混匀后即得。于4℃储存备用；

 

染色步骤：

1.用Hanks液漂洗盖玻片3次；

2.用甲醛钙固定液固定20min；

3.用蒸馏水漂洗盖玻片3次；

4.用70%乙醇将盖玻片冲洗3次；

5.用苏丹红Ⅲ染色液覆盖盖片样品，染色10—30min；

6.用70%乙醇漂洗盖片3次；

7.用甘油明胶封片后观察；

 

结果：

  原代细胞含脂类的区域呈橘红色；