Pippin Prep 片段筛选仪在核编码线粒体 mRNA 测序建库中的应用

U2AF regulates the translation and localization of nuclear-encoded mitochondrial mRNAs
U2AF 调控核编码线粒体 mRNA 的翻译及胞内定位

线粒体的分子靶向转运对维持细胞生理功能至关重要，相关调控机制尚不明确。U2AF（U2AF1/U2AF2异二聚体）可在核质间穿梭，参与经典的核内剪接调控和胞质翻译调控，其完整生理功能也有待深入解析。U2AF1-S34F 是骨髓增生异常综合征（MDS）高频出现的致病突变，可干扰基因信息正常传递。而 MDS 患者常伴随剪接因子高频突变与线粒体功能损伤，该突变致病效应是否依赖剪接调控仍不明确。

线粒体多数蛋白质由核基因编码，相关 mRNA 需靶向转运至线粒体，参与该过程的调控因子及致癌突变的影响尚待验证。本研究旨在探究 U2AF 在线粒体稳态中的功能，解析 U2AF1-S34F 介导线粒体功能紊乱的分子通路，建立突变基因型与线粒体损伤的关联，揭示 U2AF 介导核-线粒体基因组互作的新机制。

本研究构建标记细胞系，确认 U2AF 与线粒体相关 RNA、蛋白的相互结合。结合成像与免疫沉淀技术确认 U2AF 的线粒体定位，分析突变型 U2AF 对蛋白合成及线粒体功能的影响，并利用患者样本验证该机制与疾病的关联。

核糖体图谱测序（Ribo‑seq）是研究 U2AF1 调控 mRNA 翻译的关键手段。单核糖体与双核糖体（disome，核糖体碰撞）所保护的 RNA 片段，建库后的长度分别为 74–90 bp、100–130 bp，长度相近且样本含量低，传统磁珠分选分辨率不足，手工 PAGE 切胶操作繁琐、耗时长、回收率低，且易出现片段偏移。

本研究采用 Pippin Prep 全自动 DNA 片段筛选系统进行精准分选：基于 3% 无染料琼脂糖凝胶体系，分别回收 74–90 bp 单核糖体足迹和 100–130 bp 双核糖体足迹，实现两类文库的精准富集。

相较于传统筛选方法，Pippin Prep 具备筛选精度高、区间可控、操作自动化、减少人工误差、无核酸染料接触损伤、批次稳定性强等优势，可精准分离和富集单、双核糖体足迹片段，去除杂质，适合微量核糖体足迹片段的精细筛选，提升文库纯度与完整性，以及实验结果可靠性。

研究证实，U2AF 可与核编码线粒体 mRNA（NE‑mt mRNAs）及线粒体蛋白发生特异性互作，并通过翻译调控影响 NE‑mt mRNAs 向线粒体的靶向定位；U2AF1-S34F 突变会破坏该调控功能，进而引发线粒体功能异常。

原文链接：https://www.cell.com/molecular-cell/fulltext/S1097-2765(26)00162-0

全自动 DNA 切胶仪

回收范围：100 bp-1500 bp

样本通量：5 个

Sage Science 公司位于美国马萨诸塞州，2010 年成立，专注于核酸领域的样品制备，已在 2 万篇文献中应用，包括众多 Nature、Science、Cell 系列的文章，已被 DNA 片段筛选回收领域的行业用户广泛采用。

• 全自动回收：采用双通道电泳回收专利技术，回收过程全自动运行；

• 精准回收：精确度可达 93-99%，优于手工切胶和 DNA 片段分选磁珠的方法

• 微量回收：低起始量，低至 ng 级，控制时间回收，不直接检测样品

• 高回收率：50-80% 的高回收得率

• 省时间：5 分钟的手工操作时间，无需额外制胶和切胶

• 全自动完成 DNA 片段分选，软件中自由选择需要筛选的片段范围，免去了切胶纯化的繁琐步骤，比核酸片段筛选磁珠更加精准可控；

• 用于 DNA 常规分子生物学，精准有效去除 PCR 引物二聚体、非特异性片段等，去除酶切产物中非目标 DNA 条带；

• 用于小片段 DNA 筛选回收（DNA Size Selection），如小 RNA/small RNA 文库回收、cfDNA/ctDNA 循环血游离DNA/循环血肿瘤 DNA 测序文库、ddRAD-SEQ 双酶切简化基因组测序文库、16S 文库微生物测序文库回收、ChIP-SEQ 文库、MeDIP-SEQ/hMeDIP-SEQ 甲基化 DNA 免疫沉淀片段测序文库、ATAC-SEQ 转座酶可及染色质高通量测序文库、遗传病 panel 扩增子文库等各种复杂样本的处理，提高测序数据质量；

• 低起始量样品的精准浓缩回收：血浆/血清 cfDNA/ctDNA，微量细胞/单细胞，空气/冰川/岩石样本，低丰度病原体等；

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环亚生物：为科研提供“全链条”支持

环亚生物科技（APG BIO）作为美国 Sage Science 公司 DNA 片段回收系列产品在中国区的独家代理商，为国内二代测序、三代测序用户提供测序样品前处理、质控的整体解决方案：组织研磨仪、单细胞悬液制备仪、细胞破碎仪、超声聚焦打断仪、全自动 DNA 片段分选回收仪、核酸片段分析仪、脉冲场电泳仪、全自动建库仪、荧光计、超微量分光光度计等。