Qk120重组人玻连蛋白用于iPSC无饲养层培养
摘要：在诱导多能干细胞（iPSC）培养中，包被基质的选择直接关系到细胞贴附、扩增及培养体系的稳定性。Qkine 推出的高纯度重组人 Vitronectin（Qk120），凭借明确的产品组成、严格的质量控制及原厂 iPSC 培养验证数据，为无饲养层干细胞培养提供了可靠的基质蛋白选择。
关键词：Vitronectin、重组人玻连蛋白、VTN 蛋白、Qkine、Qk120、iPSC 包被基质、iPSC 培养、干细胞培养、无饲养层培养、细胞外基质、类器官研究、定向分化研究
一、iPSC 稳定培养，为什么包被基质同样重要？
诱导多能干细胞（iPSC）在疾病建模、药物筛选、再生医学及细胞治疗研究中发挥着越来越重要的作用。然而，在日常培养过程中，研究人员往往会遇到细胞贴附效率不稳定、细胞集落形态变化、培养重复性不足等问题。
除培养基组成和传代操作外，细胞外基质（ECM）也是影响培养表现的重要因素。
玻连蛋白（Vitronectin，VTN）是一种天然存在于细胞外基质和血浆中的糖蛋白，能够通过与细胞表面整合素（Integrins）相互作用，参与调控细胞贴附、迁移和存活。
在 iPSC 和胚胎干细胞（ESC）培养中，Vitronectin 常被应用于无饲养层培养体系，可为细胞提供适宜的贴附环境，支持其扩增及多能性维持。
二、Qkine 高纯度重组人 Vitronectin（Qk120）
英国重组蛋白生产商 Qkine 推出的 Qk120 重组人 Vitronectin，是一款适用于多能干细胞培养的截短型重组人玻连蛋白。
图 1：Qkine 高纯度重组人 Vitronectin（Qk120）
该产品采用大肠杆菌表达体系，在英国剑桥生产，具有以下特点：
- 高纯度：SDS-PAGE 定量分析纯度＞98%。
- 无动物源成分（AOF）：适用于需要控制动物源成分引入的培养体系。
- 无载体蛋白、无蛋白标签：组成明确，便于构建定义明确的培养体系。
- 低内毒素：＜0.05EU/µgprotein。
- 良好的蛋白回收率：＞95%。
- 严格质量控制：通过蛋白纯度、分子量及内毒素等指标进行质量评价。
Qk120 以冻干粉形式提供，具有 500µg 和 5mg 两种产品规格，可满足不同规模的科研需求。该蛋白质也可作为符合 GMP 标准的细胞治疗级产品提供，如有需求请咨询。此外 Qkine 还提供牛（Qk121）和猪（Qk122）的 Vitronectin，以及 Qk120 的 预包被 6 孔板（点击查看）。
三、原厂实验验证：支持 iPSC 生长与多能性标志物表达
除了产品质量指标，实际细胞培养表现同样是选择包被蛋白的重要依据。Qkine 在内部实验中，使用 Qk120 对培养板进行包被，并在 E8-like 培养基条件下观察 iPSC 的生长表现。
1. 支持 iPSC 贴附与集落生长
在使用 5µg/mL Qk120 进行包被的培养条件下，原厂观察了 iPSC 在不同时间点的生长状态。实验数据显示（图 2）：
- Day2：细胞接种后可观察到贴附的细胞及初步形成的集落。
- Day4：细胞形成较为明显的集落，传代前汇合度约为 85%。
- Day7：细胞保持集落生长状态，传代前汇合度约为 75%。
这些观察结果表明，在该实验条件下，Qk120 能够支持 iPSC 的贴附及后续培养。
图 2：Qkine VTN（Qk120）与 Thermo Scientific VTN-N（A14700）包被条件下 iPSC 在 Day2、Day4、Day7 的显微镜照片。实验结果由 Qkine 提供。
2. 多能性标志物检测
对于 iPSC 培养而言，除了关注细胞生长形态，还需要评估细胞是否保持多能性相关特征。Qkine 对 Qk120 包被培养的 iPSC 进行了免疫荧光染色，检测了三种常见的多能性标志物：OCT4、NANOG（图 3）以及 SOX2（图 4）。
图 3：Qk120 培养的 iPSC 的 OCT4、NANOG 免疫荧光染色图。所有图像均使用 EVOSM5000 在 20 倍放大下拍摄。实验结果由 Qkine 提供。
(A) 明场成像 (B) Nanog、OCT4 与 Hoechst (C) Nanog 与 Hoechst (D) OCT4 与 Hoechst (E) Hoechst (F) Nanog (G) OCT4
图 4：Qk120 培养的 iPSC 的 SOX2 免疫荧光染色图。所有图像均使用 EVOSM5000 在 20 倍放大下拍摄。实验结果由 Qkine 提供。
(A) 明场成像 (B) SOX2 与 Hoechst 染色 (C) SOX2
原厂提供的免疫荧光图像显示，培养细胞具有上述多能性相关标志物的表达。上述结果为 Qk120 在 iPSC 培养中的应用提供了实验参考。对于长期培养及特定细胞系，仍建议结合细胞形态、标志物表达和其他功能检测进行综合验证。
四、操作便捷：适用于常规细胞培养板包被
Qkine 提供了 Qk120 的培养板包被参考方案，便于研究人员在现有培养流程中开展验证。
推荐包被条件
| 项目 | 推荐条件 |
| 储备液浓度 | 1mg/mL |
| 工作液浓度 | 5μg/mL |
| 稀释液 | 不含 Ca²⁺、Mg²⁺ 的 PBS |
| 包被温度 | 37℃ |
| 包被时间 | 至少 2 小时 |
| 6 孔板单孔用量 | 1mL 工作液 |
使用时，将 Qk120 冻干粉按照说明复溶，再使用不含钙镁离子的 PBS 稀释至工作浓度，即可用于培养板包被。
不同培养板规格可根据培养面积调整包被液体积。具体操作以原厂说明及实验室验证结果为准。
五、从 iPSC 培养到更多细胞研究应用
在干细胞培养技术不断发展的今天，构建稳定、可重复且组成明确的培养体系，离不开对每一个关键培养组分的合理选择。
从细胞贴附到多能性相关特征的维持，细胞外基质的作用不容忽视。
除 iPSC 无饲养层培养外，Vitronectin 还可用于多种与细胞贴附和细胞外基质相关的研究。根据 Qkine 官方资料，Qk120 可考虑应用于：
- 多能干细胞研究：iPSC、ESC 的培养、扩增及分化。
- 定向分化研究：支持神经、中胚层及其他特定谱系分化体系的开发。
- 类器官研究：探索细胞贴附、增殖及基质环境相关应用。
- 再生医学与转化研究：用于开发组成明确、无动物源成分的细胞培养体系。
不同应用对细胞外基质的需求存在差异，实际适用性需要结合细胞类型、培养基及实验条件进行评估。
六、如何获取 Qkine 的 Vitronectin（Qk120）？
如您正在开展 iPSC、ESC 或相关细胞培养研究，欢迎联系上海曼博生物医药科技。上海曼博生物（点击查看）为 Qkine 的官方供应商，可直接联系我们获取 Qk120 产品资料、包被操作方案及技术支持。
另外，您也可以点击了解更多关于 Qkine 的品牌介绍和应用文章（点击查看）。
扩展阅读
关于技术来源
本文内容依据 Qkine 提供的 Qk120 产品资料及原厂 iPSC 培养验证数据整理。上海曼博生物为 Qkine 的中国官方供应商，可提供 Qk120 产品资料、包被操作方案及相关技术支持。
