流式细胞凋亡定量分析助力解析 HIF‑2α 介导的心梗内皮细胞保护作用

 
01、研究背景
急性心肌梗死引发心肌缺血，进而导致缺氧、炎症和水肿，血管通透性增加是心肌水肿的关键诱因。血管内皮细胞屏障功能直接调控血管通透性，缺氧诱导因子（HIFs）在其中发挥重要作用。

HIF-1α和HIF-2α需与芳烃受体核转位蛋白ARNT形成异源二聚体，二者激活缺氧诱导基因，其中HIF-1α广泛表达且被证实具有心脏保护作用，而HIF-2α主要表达于内皮细胞，在心肌损伤中的作用较复杂。因此，本研究构建内皮特异性HIF-2α诱导性敲除小鼠模型，探究其在心肌梗死后心脏微血管屏障功能中的作用机制。

作者单位：美国芝加哥大学医学院
期刊：Communications Biology
发表年份：2025年
样本：内皮特异性HIF-2α敲除小鼠心脏组织、人心脏微血管内皮细胞（HCMVECs）、人脐静脉内皮细胞（HUVECs）
分析设备：美国 Orflo Technologies，Moxi GO II 库尔特流式细胞仪
 
02、研究方法
研究利用Evans Blue渗漏实验、ECIS电阻抗检测和免疫荧光染色综合评估血管内皮屏障功能，结合Western blot和qPCR检测紧密连接蛋白和炎症因子表达水平，并通过成管实验分析血管生成能力。

细胞凋亡检测：美国Orflo Technologies 公司的Moxi GO II 库尔特流式细胞仪，使用Annexin V-FITC/PI双染法对HIF-2α沉默后的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）进行凋亡定量分析。将对照siRNA或HIF-2α-siRNA转染的HUVEC 细胞，在常氧或1% 低氧条件下处理 24 小时，收集细胞沉淀后，按仪器说明书（Moxi GO II –使用FITC Annexin V 和Propidium Iodide (PI)进行早期凋亡检测）配制试剂、避光孵育15分钟。最终，使用Moxi GO II 中内置的"Apoptosis"模块精准检测细胞凋亡情况。
 结果显示（图1），常氧条件下，敲低HIF-2α对HUVECs细胞的存活率及凋亡比例影响较小；缺氧环境下会显著放大HIF-2α缺失的生物学效应。相较于对照组，缺氧条件下HIF-2α敲低组的健康细胞比例大幅下降，而早期凋亡比例与晚期凋亡比例均显著上升。上述结果表明，HIF-2α在缺氧环境下对维持HUVECs细胞存活、抵抗凋亡至关重要，敲低该基因会显著加剧缺氧诱导的细胞凋亡。
黑色为Ctr-siRNA对照组；红色为HIF-2α-siRNA敲低组。图F为健康细胞比例，图G为早期凋亡细胞比例，图H为晚期凋亡细胞比例。
 
03、研究结论
本研究揭示了HIF-2α/ARNT轴是心肌梗死后心脏微血管屏障功能的关键保护机制，为改善心肌梗死后心功能提供了潜在治疗靶点。

原文链接：https://doi.org/10.1038/s42003-025-07753-1

Orflo Technologies 公司的Moxi 系列库尔特细胞计数仪及流式细胞仪，依托微流控库尔特电阻抗技术，突破传统光学检测的瓶颈，以高精度、高重复性、快速检测、极简操作、免维护的核心优势，实现了细胞计数技术的全面升级。

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