RAW264.7小鼠单核巨噬细胞培养流程及要点

RAW264.7 作为经典小鼠单核巨噬细胞白血病细胞，广泛应用于炎症、免疫、肿瘤微环境等研究。该细胞增殖快、表型敏感，培养容错率低，操作不当易出现分化、死亡等问题，下文结合标准化流程与核心要点展开说明。

一、如何规范完成细胞复苏？
复苏前将水浴锅调至 37℃，培养基预热，生物安全柜紫外灭菌 30min。液氮取出冻存管后，37℃水浴 1~2min 快速融化，酒精擦拭管壁后转移至含预热培养基的离心管。以 600rpm 离心 5min，弃上清后用完全培养基轻柔重悬，接种至培养皿，十字摇匀后置于培养箱培养。

二、传代培养有哪些核心禁忌？
细胞密度达 80% 且形态正常时即可传代，全程试剂需恢复至室温。吸弃旧培养基，PBS（abs962-500ml）清洗细胞，严禁使用胰酶消化，直接加入完全培养基DMEM（abs9483-500mL）+10%FBS（abs972-500ml）+1%P/S（abs9244-100ml）轻柔吹打收集细胞。离心后重悬，按照 1:6~1:8 比例传代，推荐使用胎牛血清（abs972-500ml）。该细胞最佳传代周期为 48h，最长不可超过 3 天，否则极易分化。

三、如何正确完成细胞冻存？
细胞密度至 80% 时参照传代方法收集细胞并离心弃上清。冻存液可选用无血清细胞冻存液 abs9417-100ml，或自行配制 90%FBS（abs972-500mL）+10%DMSO（abs9187-100mL）。重悬细胞后分装至冻存管，每管 1mL，放入冻存盒置于 -80℃冰箱过夜，次日转移至液氮长期保存，单培养皿可分装 3~4 支冻存管。

四、怎样判断细胞是否异常？
正常细胞形态圆润透亮、呈聚集生长，漂浮细胞占比低于 10%。若细胞变为梭形、多角形，代表发生分化；大量细胞漂浮、培养液出现浑浊、碎片增多，则提示细胞死亡或微生物污染。同时细胞代数建议控制在 15 代以内，高代数细胞分化概率会大幅上升。

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