ELISA试剂盒结果分析方式方法详述
浏览次数:403 发布日期:2025-3-19
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在ELISA试剂盒试验中的各项操作细节有许多,如尽量少用排枪、勤换枪头,加样时由低浓度向高浓度加,因为这样能够削减跳孔的几率。而整个试验的最后关键就是成果的处理办法了,是ELISA试剂盒结果分析方法。
1、ELISA试验中样品都要做复孔或三孔,然后计算每个浓度规范品的均匀OD值,复孔的变异系数应该小于20%。
2、均匀OD值减去空白孔的OD值。
3、规范曲线。
以减去本底后的OD值为X轴,规范品的浓度为Y轴,利用作图软件得出一个适宜的计算办法。主张运用适宜的软件来作图,比方CurveExpert 1.4。这款软件能够给出许多种办法(比方直线、半对数、对数、四参数方程等)并从中挑选一条最适宜的方程。要想检验某条曲线是否与表中数据符合,能够将规范品的浓度作为未知数,将对应的OD值带入该方程,计算出规范品的浓度,得到的成果应该与实际浓度很接近(+/-10%)。挑选拟合度最高的那条曲线。
假如出现规范曲线的线性欠好,或平行性欠好(双孔对照孔的OD值差别很大),或出现跳孔的现象,可能引起的原因有酶标板孔间相互污染、洗板后未能赶快进行下一步操作、增加样品或其它试剂时操作的办法不对、孵育方位避光性不佳或盖板膜没有密封好使得水分蒸发、酶标板孔问参加的试剂量不同,相对应的解决办法是加样时请当心勿将液体溅人另一孔中,人工洗板时也请当心,勿将洗涤液溅人另一微孔中、在洗板后及时进行下一步操作、增加试剂时请悬空滴入,切记勿将枪头接触到板孔内,汲取不同试剂瓶中的液体时就要更换一次枪头、承认孵育环境不透光,盖板膜将酶标板密封好、运用已校正过的微量加样器,如将*次参加液体时枪头上留有一滴的液体滴下,那么将以后枪头上留有的液体也滴下,以确保参加液体体积的一致性。
定性和定量是ELISA测定按其表示测定结果的方式分为的两大类。定性测定是对标本中是否存在待测抗原或抗体作出结论,分别用“阳性"和“阴性"来表示。由此可见传染性病原体的抗原或抗体通常是用的定性测定,以此判断特定病原体感染的存在与否。
定量测定基本上是用于非病原体抗原物质的测定,是对标本中待测抗原的数量进行量值测定,以具体数值来表示。定量测定,如激素、细胞因子、肿瘤标志物、小分子药物等FP,hCG、细胞因子等的定量测定。
ELISA定性测定的“阴性"和“阳性"的判定依据是试剂盒所确定的阳性判定值(cut-off)。elisa试剂盒中所带标准品同时测定得出的剂量反应曲线(又称标准曲线)是定量测定的量值依据。
ELISA定性测定结果判定中常用的一些缩写也可以帮助您看明白ELISA实验结果:
(1)S/CO:其中S为sample(样本)或specimen(标本)的简写,表示的是标本测定的吸光度值,CO为cut-off值的简写。除竞争抑制法外,其他ELISA定性测定模式中,当S/CO值大于或等于1时,标本的测定为阳性,小于1时为阴性。
(2)S/N或P/N:其中S同(1),N为negative(阴性对照)的简写,P为patient(患者)的简写。较早的试剂盒很多都使用S/N或P/N≥2.1为阳性判定标准。