通过高通量计数提升CAR-T疗法的精度

 

免疫细胞疗法，特别是CAR-T细胞疗法，利用人体免疫系统对抗疾病，尤其是癌症。CAR-T细胞是经过基因修饰的T细胞，旨在靶向并摧毁癌细胞。在CAR-T的制造过程中，EVE™ HT FL等高通量荧光细胞计数仪起着至关重要的作用。它们评估细胞活力、计数CAR-T细胞、确保原材料的质量控制、优化培养条件、确定最佳收获时间、检测污染物，并为符合监管要求的数据记录提供便利，从而提高CAR-T生产的效率和质量。

EVE™ HT FL提高了CAR-T疗法的生产效率和质量，为这种个性化免疫疗法的成功作出了贡献。

细胞疗法：组织细胞疗法、免疫细胞疗法和干细胞疗法

细胞疗法包括组织细胞疗法、免疫细胞疗法和干细胞疗法。在生物医学领域，它们作为独立的领域而存在，细胞疗法进一步分为组织细胞疗法、免疫细胞疗法和干细胞疗法。另一方面，基因治疗被分为免疫细胞基因治疗和干细胞基因治疗。本文将重点讨论免疫细胞疗法，特别是CAR-T疗法，以及如何在CAR-T生产中应用高通量荧光细胞计数仪，如 EVE™ HT FL。
 

图1 生物医学分类

什么是免疫细胞疗法？

免疫细胞疗法，也称为免疫疗法，是一种利用身体免疫系统来对抗疾病的医学方法，尤其是癌症和免疫相关疾病。这种个性化治疗包括从患者体内提取免疫细胞，在实验室中对其进行基因改造以增强其靶向能力，然后将它们重新引入患者的血液中。其应用扩展到新药开发、毒理学检测和生物标志物研究。其中一个典型的例子就是CAR-T细胞疗法，即通过工程改造使T细胞专门靶向并摧毁癌细胞。免疫细胞疗法提供针对个体免疫状况量身定制的精准医学，并已在某些癌症中显示出显著的疗效，为治疗以前具有挑战性的疾病开辟了新的可能性。当前的研究旨在扩大其适用性并优化安全性和有效性。
 

图2 CAR-T细胞疗法

 

什么是CAR-T细胞？
CAR-T细胞是经过基因修饰以产生人工T细胞受体的T细胞。这种创新的免疫疗法旨在增强T细胞识别和消除癌细胞的能力。该过程包括从个体中提取T细胞，对其进行基因改变，然后将工程化的CAR-T细胞重新引入患者体内，以更有效地靶向和摧毁肿瘤。这些CAR-T细胞既可以来自患者自身的血液(自体)，也可以来自健康供者的T细胞(同种异体)。为了确保安全，CAR-T细胞旨在特异性识别存在于肿瘤上但不识别健康细胞上的抗原。
 

图3 CAR-T细胞疗法

EVE™ HT FL：CAR-T产品的高效、准确和高通量解决方案
当处理PBMC或T细胞等细胞时，准确评估细胞浓度和活力对于在后续操作中保持质量至关重要。由于红细胞和非细胞碎片等常见污染物，这类样品中的细胞计数成为一项具有挑战性的任务，引入了耗时、主观性和更高的错误可能性等复杂性。
 

图4 EVE™ HT FL

 

当处理PBMC或T细胞等细胞时，准确评估细胞浓度和活力对于保持后续程序的质量至关重要。由于红细胞和非细胞碎片等常见污染物，这类样品中的细胞计数成为一项具有挑战性的任务，引入了时间消耗、主观性和更高的错误可能性等复杂性。
 

EVE™ HT FL是一款高通量自动荧光细胞计数仪，配备明场和两个荧光通道（AO/DAPI）。
 

AO和DAPI是荧光染料，可对靶细胞的细胞核进行染色。AO是一种可渗透的染料，无论细胞状况如何，都可以对所有细胞的细胞核进行染色。DAPI是一种不渗透性染料，仅对膜受损的非活性细胞的细胞核进行染色。
 

图5 EVE™ HT FL的基本计数原理

 

为了准确评估PBMC或干细胞等细胞类型的活力，建议使用双荧光染色。该方法可有效排除样品中的无核细胞（例如红细胞）、血小板和碎片。在短短3分钟内，可对多达48个样品进行计数和分析。
 

EVE™ HT FL如何应用于CAR-T的制造过程？
当处理PBMC或T细胞等细胞时，准确评估细胞浓度和活力对于保持后续程序的质量至关重要。由于红细胞和非细胞等常见污染物，这些样品中的细胞计数成为一项具有挑战性的任务。

 
1. 细胞活力评估

EVE™ HT FL是一款高通量荧光细胞计数仪，能够快速准确地测定活CAR-T细胞的百分比，即实时监测细胞活力。此外，它还可以实时监测细胞生长和增殖。在CAR-T生产中通常需要大量T细胞，这种能力对于确保最终CAR-T产品的整体质量至关重要。通过跟踪这些参数，研究人员可以优化培养条件，以确保产生足够数量的活CAR-T细胞。

 
2. CAR-T细胞计数

EVE™ HT FL简化了CAR-T细胞的计数过程。通过自动细胞计数，它擅长计数总细胞计数，包括活细胞和非活细胞，进一步促进了细胞浓度的测定。这允许在制造过程的各个阶段准确接种细胞。这对于保持所需的细胞密度和优化下游工艺至关重要。

 
3. 起始材料的质量控制

CAR-T疗法的成功在很大程度上取决于起始T细胞群的质量。EVE™ HT FL有助于全面评估细胞形态、大小和整体质量。确保起始T细胞符合预定标准对于一致和有效的CAR-T生产至关重要。

 
4. 优化培养条件

对细胞培养物的持续监测有助于深入了解不同培养条件对CAR-T细胞生长和健康的影响。研究人员可以使用这些信息来优化培养基组成、孵育参数和其他变量，从而提高CAR-T细胞的生产效率。

 
5. 确定最佳收获时间

EVE™ HT FL有助于确定CAR-T细胞的最佳收获时间。通过在培养期间监测细胞活力，研究人员可以确定细胞表现出最大活力且最适合收获的时间点，从而优化整体生产时间表。

 
6. 检测污染物或异常

AO/DAPI染色可以突出显示细胞群中的污染物或异常。可以快速识别细胞形态的偏差或不需要的细胞类型的存在，从而可以采取纠正措施来保持CAR-T细胞产品的纯度。

 
结论

EVE™ HT FL可以应用于CAR-T生产，提供评估细胞活力、计数细胞计数、监测细胞生长和确保CAR-T细胞产品整体质量的功能。其高通量特性有助于提高生产过程的效率和成功，最终影响CAR-T细胞疗法的治疗效果。