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使用安装框架进行光片样品准备

浏览次数:1517 发布日期:2024-9-6  来源:徕卡显微镜
样品处理通常是光片显微镜研究中的一个关键话题。徕卡显微系统的TCS SP8 DLS将光片技术集成到倒置共聚焦平台中,因此可以利用关于样品安装和XY-stage功能的一般原则。本文将描述一组安装框架,这些框架不仅允许准备更多的样品,尤其是在使用诸如BABB(苯甲醇苯甲酸酯)等潜在有害的安装介质时,亦具有广泛的适用性。

 

样品架:

这里介绍的样品架是为数字光片(DLS)成像设计的,但同样适用于传统的直立式和倒置式显微镜成像。

 

简介:

在使用SP8 DLS模块进行成像时,样品被放置在TwinFlect镜子之间。

X方向的移动范围由所使用的TwinFlect镜子的距离(2.5毫米、5毫米或7.8毫米)决定。最大移动范围大约是镜子之间距离的一半。

图 1:由 TwinFlect 镜子定义的 x 方向移动范围。y 方向的移动范围由安装盘的大小决定。

 

Y方向的移动范围则由样品架的形状和大小(如培养皿)决定。

对于标准的35毫米培养皿(玻璃底直径20毫米),Y方向的移动范围相对有限,不会接触到皿的边缘:

图 2:使用标准 35 毫米培养皿时 y 方向的受限移动范围。

 

使用矩形24 x 50毫米盖玻片的样品夹时,Y方向的移动范围增加,使得可以使用更大或更长的样品。此外,这种设计还能够增加在一次实验中成像的样品数量,非常适合多位置实验。

图 3:矩形 24 x 50 mm 盖玻片在 y 方向上的行程范围增加。

 

材料与方法

安装框架套件(#158007063)包含一个用于24 x 50毫米玻璃盖玻片的样品夹,以及一个用于直径30毫米圆形盖玻片的样品夹。请注意,玻璃盖片不包含在内。

图 4:安装框架套件(样品夹矩形 24 x 50 mm + 直径 30 mm 的圆形样品夹)

24 x 50 mm 盖玻片的样品夹仅与以下 z-Galvo 载物台插入件兼容:

  • 158004118 可旋转插入件反向

  • 158004119 通用插入件

 

封闭样品架/附加玻璃盖片

对于在水溶液中的成像,可以使用硅胶(如Elastosil® 43,Wacker)或双组分Twinsil®来附加玻璃盖片。

这些样品架也适用于在更具侵蚀性的溶液中成像,例如BABB(苯甲醇/苯甲酸苄酯)。由于BABB可以溶解多种材料,因此需要使用专门类型的硅胶来密封容器,例如Elastosil® E41(Wacker)(与德国维尔茨堡大学鲁道夫·维尔乔中心的尤尔根·皮内克的个人沟通)。

 

1、在样品架底部的凹槽内缘涂抹硅胶/双硅胶。

2、添加一片玻璃盖片,并轻轻按压以确保其均匀贴合,以便在所有点上形成良好的密封。

3、要检查腔体密封,请在样品架中加入一些蒸馏水,看看是否有泄漏发生。

 

上样

在组装好带有相应玻璃盖片的安装框后,您可以选择以下不同的样品安装方式:

基于琼脂糖的上样

1、在盖片表面覆盖一层薄薄的琼脂糖(0.5-1毫米),待其聚合后,形成样品的支撑层。

2、然后将您的样品悬浮在液体琼脂糖中,放置在支撑层上

3、将您的样本(理想情况下呈一条直线)对齐以进行成像

4、从侧面去除多余的琼脂糖以为镜子留出空间。

U 型玻璃毛细管

按照《科学实验室》文章中描述的协议进行:

DLS 样品准备:使用 U 型玻璃毛细管进行样品安装。

用于固定清理组织的超级胶水

更大的(已透明化的)样本在直接粘贴到玻璃盖玻片上时,可以与样本架一起使用。

图5展示了在标准玻璃底培养皿中安装组织样本的一种简单方法。

​

客户申请 DLS 准备

在通过光片显微镜扫描的 ECi 透明化肾脏的一部分中,以实现3D 肾小球的可视化。感谢海德堡大学曼海姆医学院的Norbert Gretz教授。

 

参考文献:

1.Huang J, Brenna C, Khan AUM, Daniele C, Rudolf R, Heuveline V, Gretz N , A cationic near infrared fluorescent agent and ethyl-cinnamate tissue clearing protocol for vascular staining and imaging, Sci Rep. 2019 Jan 24;9(1):521

 

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标签: 光片显微镜
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