使用活细胞成像仪检测细胞倍增时间
浏览次数:1947 发布日期:2024-8-26
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摘要:
细胞倍增时间是指细胞群体从初始数量翻倍所需的时间。这个指标在细胞生物学和细胞治疗领域非常重要,因为它可以帮助评估细胞的生长速率和健康状况。
正文:
在细胞生物学与细胞治疗的广阔领域,细胞倍增时间如同一把钥匙,解锁着细胞生长速率与健康状态的奥秘。
定义:细胞倍增时间是指细胞群体从初始数量翻倍所需的时间。它是衡量细胞增殖能力的重要参数。
影响因素:细胞倍增时间受到多种因素的影响,包括细胞类型、培养条件、营养物质供应、环境因素(如温度、pH值)、细胞外基质等。
测量方法:细胞倍增时间可以通过多种方法测量,包括细胞计数、DNA含量测量等。
①细胞计数法:
优点:操作简单,直观。
缺点:可能会受到人为误差的影响,不适合大量细胞的计数。
②细胞生长曲线法:
优点:通过绘制细胞数量随时间变化的曲线,可以准确测量倍增时间。
缺点:需要多次取样和计数,耗时较长。
③DNA含量测量:
优点:可以通过测量DNA含量来估算细胞数量。
缺点:需要特定的染色剂和设备,可能受到细胞周期阶段的影响。
④细胞增殖测定试剂盒:
优点:操作简便,灵敏度高,如MTT、BrdU等。
缺点:某些试剂可能对细胞有毒性或受到细胞类型和培养条件的限制。
⑤基于图像的分析:
优点:可以提供细胞形态和分布的详细信息。
缺点:需要图像处理软件和分析技能,可能受到图像质量的影响。
⑥流式细胞仪分析:
优点:可以同时测量多种细胞特性,如细胞大小、复杂性等。
缺点:需要专门的设备和技术,可能受到细胞碎片的干扰。
以上是常用的几种方式,而今天呢,本文推荐一个新方法:
使用活细胞成像仪联合一个在线工具(https://www.doubling-time.com/compute_more.php)用来计算细胞倍增时间。
优点:无需频繁计数细胞数量,无需手动绘制生长曲线,自动化程度高,仅需依靠成像设备的扫描与分析软件便可得到客观的融合度结果,极大的减少人为误差以及节省研究时间。
图1. 新方法示例图
以下则为一项实验的示例。
细胞系:Hela细胞
处理因素:不同浓度的抗癌药物Nocodazole(6.625 nM、31.25 nM、62.5 nM、125 nM、250 nM)
成像设备:Celloger
® Mini Plus(4X,GFP)
实验耗材:48孔板
细胞铺板量:1×10
4个/孔
荧光染料:CellTox
总拍摄时长:48H
间隔拍摄时长:1H
结果:用不同浓度的Nocodazole处理细胞并进行延时成像,细胞形态呈浓度依赖性变化,在明场视野下观察到细胞融合度减小,细胞生长曲线图也呈现同样的趋势。
因为高浓度处理组细胞逐渐死亡,后续不再计算高浓度处理组细胞的倍增时间。
未处理组与低浓度处理组的倍增时间分别为:
| Drug Concentration(nM) |
0nM |
31.25nM |
| Time(h) |
36.11 |
40.06 |
图2. 各浓度Nocodazole的明场与荧光视野图像
(图像显示以24h为间隔时间,绿色荧光表示死亡细胞。比例尺,200 μm)

图3. 细胞随时间变化的融合率(%)数据图

图4. 使用在线工具计算倍增时间过程
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