English | 中文版 | 手机版 企业登录 | 个人登录 | 邮件订阅
生物器材网 logo
生物仪器 试剂 耗材
当前位置 > 首页 > 技术文章 > 定量聚合酶链式反应的基本原理和检测方法

定量聚合酶链式反应的基本原理和检测方法

浏览次数:473 发布日期:2024-7-16  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
定量聚合酶链式反应(qPCR)是分子生物学领域的一项创新技术,取得了良好的精确性和准确性,已经深刻改变了生物医学研究的面貌。

作为经典PCR技术的高级形式,qPCR,亦称实时定量PCR,利用特定染料在新合成的DNA链中的荧光信号,或者利用针对特定DNA序列的探针的片段,来监测DNA的互补过程这种技术的核心优势在于,它能够将DNA的检测和扩增过程相结合,从而能够即时地为科研工作者提供重要的数据信息。

在其基本操作原理上,qPCR与传统PCR技术相似,通过DNA聚合酶催化DNA的补充,将新的标记序列添加到短的单链DNA片段上,即引物的3'-OH断裂,以这一系列反应在配备有荧光检测设备的特制热循环仪内进行,通过测量荧光信号强度,将其与预定的参考值相比较,实现DNA含量的相对或绝对定量。实时监测、高灵敏度和特异性使 qPCR 能够精确测量遗传物质,并使 qPCR 在各种应用中具有不可估量的价值。

qPCR 的工作原理:

典型的 qPCR 反应开始于含有 DNA 聚合酶、脱氧核苷酸三磷酸酯(dNTP)、引物、染料或报告基因和模板 DNA 的混合母液。
 
04qPCR 的关键步骤:


变性阶段:在高温环境中(通常在94至98°C之间),双链DNA解开成多余单链。
初步阶段:在温度稍低的环境中(大约在50至70°C之间),使引物与特定的模板DNA目标区域相结合。
延伸阶段:DNA 聚合酶通过向引物 (68-72°C) 中添加核苷酸来产生两条互补的 DNA 链
定量完成阶段:在每一轮DNA补充时,利用荧光计测量并记录荧光信号,以定量分析。

qPCR 检测方法:
 常见的qPCR检测方法包括DNA插层染料、水解探针、分子信标和LNA探针。

发布者:上海博湖生物科技有限公司销售部
联系电话:021-57763112
E-mail:3004987436@qq.com

用户名: 密码: 匿名 快速注册 忘记密码
评论只代表网友观点,不代表本站观点。 请输入验证码: 8795
Copyright(C) 1998-2026 生物器材网 电话:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com