蜂胶软胶囊中总黄酮测定方法
引言
蜂胶是由蜜蜂，特别是工蜂，从植物的树胶、树脂中采集，并与上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成 的具有黏性的固体胶状物。现代研究结果表明，蜂胶含有维生素、酚类、蓓烯类、黄酮类化合物等多种营养保健成分。在蜂胶的众多活性物质中，黄酮类物质是最为关键的成分之一，它具有抗菌、杀毒、 消炎止痛、降血脂、促进机体组织再生和增强机体免疫能力等功效。近年来，蜂胶产品在市场上受到了广泛的关注和认可，其种类也日益丰富，主要以胶囊形式呈现。蜂 胶中主要活性成分为黄酮类化合物，已成为研究热点，且市售的蜂胶胶囊类产品均以总黄酮含量作为评价指标。黄酮类化合物的测定有多种方法，如液相色谱法﹑分光光度法等，液相色谱法可以测定单一的黄酮成分，分光光度比色法可以测定黄酮成分的总量。 紫外分光光度法被广泛应用于测定蜂胶制品中的总黄酮含量，因为它具有操作简便、准确度高且易于实施的特点，因此深受广大研究者的青睐。
实验方法：根据《蜂胶中总黄酮含量的测定方法分光光度比色法》（GB/T 20574—2006），利用分光光度比色法对蜂胶软胶囊中的总黄酮进行定量分析。
试剂
芦丁标准品（含量95.5%，批号 2251131）；
无水乙醇、硝酸铝、95% 乙醇、醋酸钾，分析纯
仪器
UV-1800紫外可见分光光度计；
超声波清洗仪；
高速台式离心机；
BT25S 十万分之一电 子天平、BSA224S-CW 电子天平。
试样的制备
称取蜂胶软胶囊内容物0.5g（精确至1mg）于烧杯中，加入95%乙醇约30mL，室温下超声提取20 min，将溶液转移至50mL的容量瓶中，加入95%乙醇至刻度线，混合均匀后进行过滤，弃去初滤液， 收集滤液待测。准确吸取1.0mL待测溶液于50mL容量瓶中，分别加入1.0mL硝酸铝溶液和1.0mL醋酸钾溶液，加95%乙醇至刻度，摇匀，静置10min，3 000 r·min-1离心3min，取上清液待测。空白实验精密吸取1.0mL待测溶液于50mL容量瓶中，加95%乙醇至刻度，摇匀。用1cm比色皿，在415nm以空白试液作参比，测定样品吸光度。
标准溶液制备
称取10.50mg芦丁标准品（含量95.5%）于50 mL容量瓶中，用无水乙醇溶解，并定容至刻度，摇匀， 溶液浓度为0.2 g·L-1 。吸取标准溶液0mL、1.00 mL、 2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL和6.00 mL（相当于芦丁含量 0 mg、0.2 mg、0.4 mg、0.6 mg、0.8 mg、
1.0 mg 和1.2 mg），分别置于50 mL容量瓶中，向容量瓶中加入1.0mL硝酸铝溶液和1.0mL醋酸钾溶液，用95%乙醇定容至刻度，摇匀，静置10 min后测定。
结果计算
总黄酮计算公式为
式中：X 为黄酮类化合物的总含量，%；
m1 为 由标准曲线上查出测定液中芦丁质量，mg；
m 为样品的质量，g；
d 为稀释比例。
蜂胶是由蜜蜂，特别是工蜂，从植物的树胶、树脂中采集，并与上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成 的具有黏性的固体胶状物。现代研究结果表明，蜂胶含有维生素、酚类、蓓烯类、黄酮类化合物等多种营养保健成分。在蜂胶的众多活性物质中，黄酮类物质是最为关键的成分之一，它具有抗菌、杀毒、 消炎止痛、降血脂、促进机体组织再生和增强机体免疫能力等功效。近年来，蜂胶产品在市场上受到了广泛的关注和认可，其种类也日益丰富，主要以胶囊形式呈现。蜂 胶中主要活性成分为黄酮类化合物，已成为研究热点，且市售的蜂胶胶囊类产品均以总黄酮含量作为评价指标。黄酮类化合物的测定有多种方法，如液相色谱法﹑分光光度法等，液相色谱法可以测定单一的黄酮成分，分光光度比色法可以测定黄酮成分的总量。 紫外分光光度法被广泛应用于测定蜂胶制品中的总黄酮含量，因为它具有操作简便、准确度高且易于实施的特点，因此深受广大研究者的青睐。
实验方法：根据《蜂胶中总黄酮含量的测定方法分光光度比色法》（GB/T 20574—2006），利用分光光度比色法对蜂胶软胶囊中的总黄酮进行定量分析。
试剂
芦丁标准品（含量95.5%，批号 2251131）；
无水乙醇、硝酸铝、95% 乙醇、醋酸钾，分析纯
仪器
UV-1800紫外可见分光光度计；
超声波清洗仪；
高速台式离心机；
BT25S 十万分之一电 子天平、BSA224S-CW 电子天平。
试样的制备
称取蜂胶软胶囊内容物0.5g（精确至1mg）于烧杯中，加入95%乙醇约30mL，室温下超声提取20 min，将溶液转移至50mL的容量瓶中，加入95%乙醇至刻度线，混合均匀后进行过滤，弃去初滤液， 收集滤液待测。准确吸取1.0mL待测溶液于50mL容量瓶中，分别加入1.0mL硝酸铝溶液和1.0mL醋酸钾溶液，加95%乙醇至刻度，摇匀，静置10min，3 000 r·min-1离心3min，取上清液待测。空白实验精密吸取1.0mL待测溶液于50mL容量瓶中，加95%乙醇至刻度，摇匀。用1cm比色皿，在415nm以空白试液作参比，测定样品吸光度。
标准溶液制备
称取10.50mg芦丁标准品（含量95.5%）于50 mL容量瓶中，用无水乙醇溶解，并定容至刻度，摇匀， 溶液浓度为0.2 g·L-1 。吸取标准溶液0mL、1.00 mL、 2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL和6.00 mL（相当于芦丁含量 0 mg、0.2 mg、0.4 mg、0.6 mg、0.8 mg、
1.0 mg 和1.2 mg），分别置于50 mL容量瓶中，向容量瓶中加入1.0mL硝酸铝溶液和1.0mL醋酸钾溶液，用95%乙醇定容至刻度，摇匀，静置10 min后测定。
结果计算
总黄酮计算公式为
式中：X 为黄酮类化合物的总含量，%；
m1 为 由标准曲线上查出测定液中芦丁质量，mg；
m 为样品的质量，g；
d 为稀释比例。
