CCK8试剂检测耐药细胞株PC9R对吉非替尼耐药作用的方法及步骤

 
细胞： PC9R 、PC9
药物：吉非替尼
仪器与试剂： CCK8 试剂 日本同仁；
分光光度计 TECAN
 
实验过程：
一：细胞培养
PC9R 和 PC9 均采用含 10％胎牛血清，1%双抗(青链霉素混合液) 的 DMEM 培养基，置于 37℃， 5% CO2 的培养箱中进行培养。显微镜下观察细胞状态。
 
二、 吉非替尼药物贮藏液的配置
向已称好样本重量的 EP 管中直接加入 DMSO 稀释成 50mmol/L 的浓度，使 用前再稀释弄所需的使用浓度。
 
三、 CCK8 试验
1.  在 96  孔板中配制 100 ul 的细胞悬液(2000–3000 cells/孔)。将培养板在培养 箱预培养 24 小时 (  在 37℃，  5% CO2 的条件下 )。
2.   向培养板加入 10  ul  八个浓度 (0.390625uM,  0.78125uM,  1.565uM,  3.125 uM ,6.25 uM, 12.5 uM, 25uM, 50 uM) 的待测药物。
3.  将培养板在培养箱孵育 24 小时。
4.  向每孔加入 10 ul CCK-8  溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O. D 值 的读数，斜着培养板壁加， 不要插到培养基液面下加)  。加入后轻轻振摇培养板。
5.  将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
6.  用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。