ELISA试验过程气泡产生的原因和避免方法
浏览次数:578 发布日期:2024-4-8
来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
气泡在酶标板实验过程中是一个常见的现象,它们的存在可能会对实验结果产生显著的影响。为了确保实验的准确性和可靠性,了解气泡的形成原因、影响以及如何避免它们至关重要。通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围,导致孔中液体不能与孔壁有效接触,使孔内反应不均一。在做实验的过程中,有时为了打干净枪头里面的液体,很容易产生气泡。
ELISA试验产生气泡原因:
1.通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围,导致孔中液体不能与孔壁有效接触。
2.孔内反应不均一。
3.包被时有气泡的话,将导致包被不完全实际包被量下降--弱阳性甚至假阴性。
4.封闭时有气泡的话,将导致大量未结合位点的存在,引起非特异性结合--本底增高,假阳性。
5.加样时有气泡的话,抗原抗体不能有效的结合--弱阳性甚至假阴性。
6.加二抗时有气泡的话,抗原抗体不能有效的结合--弱阳性甚至假阴性(竞争法相反----假阳性)。
7.加显色液时有气泡的话---显色不完全。
8.加终止液时有气泡的话(1、不能完全终止反应 2、影响酶标仪比色,OD值增高)
9.洗涤时有气泡的话,非特异性结合物不能完全洗去,做无用功。
避免方法:
1.加样时尽量靠近孔底(不要接触孔底),用力均匀,不要过快过猛。
2.封闭时一定要加满孔。
3.洗涤时一定要加满孔(重要),气泡会浮上来*终驱除。手工洗板时一定要吸干水分并用力拍干。