WB结果中杂带较多及信号问题解析参考
1、WB结果中杂带较多
可能的原因及建议：
①目的蛋白存在多个修饰位点(磷酸化位点、糖基化位点等等)，本身可以出现多条带。查文献或生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，去除修蛋白饰后确定蛋白实际大小，这个需要一定的生物化学基础和生信分析能力。
②目的蛋白有其它剪切本，查阅文献或生物信息学分析其可能性。
③样本处理过程中目的蛋白发生降解，加入蛋白酶抑制剂；样本处理在冰上操作。
④上样量过高，过于敏感，适当减少上样量。
⑤一抗特异性不高，重新选择或制备高特异性的抗体。
⑥一抗不纯，纯化抗体。
⑦一抗或者二抗浓度偏高，适当降低抗体浓度。
2、WB结果中无信号或显示信号弱
可能的原因及建议：
①你所检测的样本中不表达目的蛋白，选择表达量高的细胞作为阳性对照，用于确定检测样本是否为阴性，同时查阅文献。
②检测样本低表达目的蛋白，提高上样量，裂解液中注意加入蛋白酶抑制剂。
③转移不完全或过转移，可以用丽春红染膜并结合染胶(考马斯亮蓝)后确定条带是否转至膜上或转移过头；适当调整转膜的时间和电流。
④抗体不能识别测试种属的相关蛋白，购买抗体前应当认真阅读抗体说明书，确定其是否能够交叉识别测试种属的对应蛋白。
⑤一抗孵育时间不足，建议4℃结合过夜。
⑥二抗与一抗不匹配，选择针对一抗来源的种属的抗体。
⑦洗膜过度，洗膜时间不宜过长，加入的去垢剂不宜过强或过多，建议使用0.1%的弱去垢剂Tween-20。
可能的原因及建议：
①目的蛋白存在多个修饰位点(磷酸化位点、糖基化位点等等)，本身可以出现多条带。查文献或生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，去除修蛋白饰后确定蛋白实际大小，这个需要一定的生物化学基础和生信分析能力。
②目的蛋白有其它剪切本，查阅文献或生物信息学分析其可能性。
③样本处理过程中目的蛋白发生降解，加入蛋白酶抑制剂；样本处理在冰上操作。
④上样量过高，过于敏感，适当减少上样量。
⑤一抗特异性不高，重新选择或制备高特异性的抗体。
⑥一抗不纯，纯化抗体。
⑦一抗或者二抗浓度偏高，适当降低抗体浓度。
2、WB结果中无信号或显示信号弱
可能的原因及建议：
①你所检测的样本中不表达目的蛋白，选择表达量高的细胞作为阳性对照，用于确定检测样本是否为阴性，同时查阅文献。
②检测样本低表达目的蛋白，提高上样量，裂解液中注意加入蛋白酶抑制剂。
③转移不完全或过转移，可以用丽春红染膜并结合染胶(考马斯亮蓝)后确定条带是否转至膜上或转移过头；适当调整转膜的时间和电流。
④抗体不能识别测试种属的相关蛋白，购买抗体前应当认真阅读抗体说明书，确定其是否能够交叉识别测试种属的对应蛋白。
⑤一抗孵育时间不足，建议4℃结合过夜。
⑥二抗与一抗不匹配，选择针对一抗来源的种属的抗体。
⑦洗膜过度，洗膜时间不宜过长，加入的去垢剂不宜过强或过多，建议使用0.1%的弱去垢剂Tween-20。
