植物叶绿素（chlorophyll）含量试剂盒使用说明书

 
注   意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：
植物叶绿素广泛存在于绿色植物组织中，其含量与光合作用、营养状况密切相关，是反应植物生长状况的重要指标。

测定原理：
叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有最大吸收，根据经验公式可计算得叶绿素a和叶绿素b以及总叶绿素含量。

自备实验用品及仪器：
天平、研钵、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、10mL玻璃试管、锡箔纸、丙酮。

试剂组成和配制 ：
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。          

测定操作：

• 称取约新鲜植物叶片或其它绿色组织，去掉中脉，称取约0.1g，剪碎，用蒸馏水洗干净。
• 提取液的准备：取120mL蒸馏水和480mL丙酮，充分混匀待用。
• 加入1mL蒸馏水，少量试剂一（约50mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入10mL玻璃试管。
• 用提取液冲洗研钵，将所有冲洗液转入玻璃试管，用提取液定容至10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h，观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至其完全变白。
• 取浸提液1mL于1mL玻璃比色皿，提取液调零，测定663nm和645nm处吸光值，分别记为A₆₆₃和A₆₄₅ 。

 
计算公式：
叶绿素a含量（mg/g 鲜重）=（12.7× A₆₆₃ – 2.69 × A₆₄₅）×V提×D÷m÷1000
                    = 0.01×（12.7× A₆₆₃ – 2.69 × A₆₄₅）×D÷m
叶绿素b含量（mg/g 鲜重）=（22.9× A₆₄₅ – 4.68 × A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000
                    = 0.01×（22.9× A₆₄₅ – 4.68 × A₆₆₃）×D÷m
叶绿素总含量（mg/g 鲜重）=（20.21× A₆₄₅ +8.02 × A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000
                    = 0.01×（20.21× A₆₄₅ +8.02 × A₆₆₃）×D÷m
V提：提取液体积，10mL；D：稀释倍数；m：样本质量，g
 
注意事项：

• 叶绿素对光敏感，研磨和提取等操作尽量避光或者在弱光下进行。
• 一定要浸提至组织残渣完全变白，否则提取不充分。
• 用提取液冲洗研钵一定要冲洗至所有的绿色物质被转移至玻璃试管。
• 测定时吸光值超过1，可进行适当稀释。