PCR反应出现非特异性扩增带原因介绍

PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：
一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。
二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次，是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶的量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：
1、必要时，重新设计引物。
2、减低酶的量或调换另一来源的酶。
3、降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。
4、适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸，也叫两步法)。