Tuner（DE3）pLysS 感受态细胞细胞培养操作规程
Tuner（DE3）pLysS 感受态细胞细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
人视网膜微血管内皮细胞完全培养基
人角膜成纤维细胞完全培养基
人小梁网细胞完全培养基
人视网膜muller细胞完全培养基
人角膜内皮细胞完全培养基
人脉络膜微血管细胞完全培养基
人牙周膜成纤维细胞完全培养基
大鼠肺微血管内皮细胞完全培养基
大鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基
大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基
大鼠气管上皮细胞完全培养基
大鼠气管平滑肌细胞完全培养基
大鼠肺成纤维细胞完全培养基
大鼠支气管上皮细胞完全培养基
大鼠支气管成纤维细胞完全培养基
大鼠肺大静脉平滑肌细胞完全培养基
大鼠肺大动脉平滑肌细胞完全培养基
大鼠肺大动脉内皮细胞完全培养基
大鼠肺动脉成纤维细胞完全培养基
大鼠肺大静脉内皮细胞完全培养基
大鼠气管和支气管上皮细胞完全培养基
大鼠胰岛细胞完全培养基
大鼠胰腺星状细胞完全培养基
大鼠胰腺导管上皮细胞完全培养基
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
人视网膜微血管内皮细胞完全培养基
人角膜成纤维细胞完全培养基
人小梁网细胞完全培养基
人视网膜muller细胞完全培养基
人角膜内皮细胞完全培养基
人脉络膜微血管细胞完全培养基
人牙周膜成纤维细胞完全培养基
大鼠肺微血管内皮细胞完全培养基
大鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基
大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基
大鼠气管上皮细胞完全培养基
大鼠气管平滑肌细胞完全培养基
大鼠肺成纤维细胞完全培养基
大鼠支气管上皮细胞完全培养基
大鼠支气管成纤维细胞完全培养基
大鼠肺大静脉平滑肌细胞完全培养基
大鼠肺大动脉平滑肌细胞完全培养基
大鼠肺大动脉内皮细胞完全培养基
大鼠肺动脉成纤维细胞完全培养基
大鼠肺大静脉内皮细胞完全培养基
大鼠气管和支气管上皮细胞完全培养基
大鼠胰岛细胞完全培养基
大鼠胰腺星状细胞完全培养基
大鼠胰腺导管上皮细胞完全培养基
