对比细胞因子的检测方法

细胞因子（cytokine，CK）：是由免疫细胞（如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）和某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成（一般是免疫细胞）、分泌的一类生物活性物质分泌的蛋白质，在体内广泛参与免疫调节及炎症反应、组织修复、刺激造血系统、刺激细胞的增殖与凋亡等重要生理活动，在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中均起重要作用。
      
​细胞因子的检测方法一般分为生物学、分子生物学测定法及免疫学。
1、生物学测定法 其原理是根据细胞因子对特定的依赖性细胞株(即靶细胞)的促增殖作用,以增殖细胞中的DNA的合成或酶活性为指标,间接推算出细胞因子的活性单位,如对IL-1、IL-2等细胞因子活性的检测。亦可根据某些细胞因子对特定靶细胞的杀伤效应或对病毒的抑制作用进行测定,如对肿瘤坏死因子及干扰素的生物活性测定。

2、分子生物学测定法 目前采用的技术有各种印迹法、斑点杂交、原位杂交和PCR等。通过检测细胞内细胞因子的基因组成或mRNA量,推算出细胞因子的合成量。

3、免疫学检测法 其基本原理是将细胞因子作为抗原进行定量检测。如免疫斑点法、ELISA法、免疫印迹法和流式细胞仪等均已用于细胞因子的检测。

细胞因子的检测方法对比:
1、酶联免疫吸附实验（ELISA）
原理：使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。由于酶的催化频率很高，故可放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。
优点：避免特异性抗体直接标记，便宜。
缺点：所需样本量多、每次仅能测定一项细胞因子、操作步骤和测定时间过长、酶联反应所致的人工假象

2、流式细胞仪（CBA）
原理：利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒——待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量。

优点：所需样本量少、快速（实验6-8h可以完成）操作简便、灵敏度高、重复性好、高效（同一个样品可以同时检测多个因子）、安全、接近生物体的分析条件（全血检测保留细胞及生化微环境更准确反应了体内状况）。
缺点：价格略贵

3、免疫印迹法（WB）
原理：是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离细胞或者组织样本中的蛋白，经转膜、封闭后目标蛋白与特有性一抗结合，再与辣根过氧化物酶（HRP）标记的第二抗体起反应，经过底物显色，分析曝光条带的位置和灰度分析获知目标蛋白在样本中的表达情况
优点：高特异性、高敏感性
缺点：细胞因子分析量较小，用WB进行检测有些不合适