Biochrom30+氨基酸分析仪检测红鱱鱼中水解氨基酸

摘要：
以红鱱鱼为原料，使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明红鱱鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为16558.3mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的39.78%，鲜味氨基酸占氨基酸总量的39.09%。
 

• 样品前处理

一、所用试剂

1. 浓盐酸，浓度≥36%,优级纯
2. 6mol/L 盐酸：取500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀。
3. 水：去离子水
4. 苯酚：须重蒸
5. 17种氨基酸标准品

 
二、前处理设备

1. 分析天平:感量分别为 0.0001g和0.00001g。
2. 水解管:耐压螺盖玻璃试管,体积为25mL
3. 匀浆机。
4. 无油真空泵
5. 干浴水解浓缩仪
6. 移液管
7. 0.22um滤膜

 
三、样品制备

（参考国标GB 5009.124-2016）原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏，采肉后清洗、沥干，在匀浆机中打成肉糜，于-18℃冰箱中冷冻保存，分析时取出解冻后使用 

四、试样水解

称取含蛋白7.5-25mg的试样，加入水解管中，加入15mL 6mol/L盐酸，继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖。 将水解管放入干浴水解浓缩仪中，110°C水解22-24h，冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中，用移液管取适量样液，在干浴水解浓缩仪中50°C吹干，必要时加入少许水，重复吹干1-2次，加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解,振荡混匀后,吸取溶液通过0.22μm 滤膜后,转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用。 
 

• 分析方法描述（Biochrom 30+）
• 氨基酸分析仪分析方法参数:

1. 色谱柱：Biochrom Na型阳离子交换树脂柱，4.6´20cm
2. 分离程序：

NO.	Time	Temp	Buffer	Pump	Nin	Rec	Commands
1	01:00	48	1	35.0ml/h	ON	OFF
2	00:00	48	1	35.0ml/h	ON	OFF	Reset
3	01:00	48	1	35.0ml/h	ON	OFF	Load
4	06:40	48	1	35.0ml/h	ON	ON
5	13:00	52	2	35.0ml/h	ON	ON
6	01:00	52	5	35.0ml/h	ON	ON
7	16:00	95	5	35.0ml/h	ON	ON
8	04:00	95	6	35.0ml/h	ON	ON
9	04:00	95	1	35.0ml/h	ON	ON
10	09:00	48	1	43.0ml/h	OFF	OFF
11	02:00	48	1	35.0ml/h	ON	OFF
End

 

        （1）运行时间：经分析时间+再生时间 57min
        （2）反应单元温度：135°C。
        （3）检测波长：570nm、440nm同时检测。
 

• 样品中氨基酸含量的计算

       （1）计算:     ci = cs /As ×Ai……………………

          ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
          Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;
          As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;
          cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。
 
       （2）计算:     Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×10⁹) ×100 ……………………

          Xi ———试样中氨  基酸i的含量,单位为克每百克(g/100g)
          ci ———试样测定液中氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
          F ———稀释倍数;
          V ———试样水解液转移定容的体积,单位为毫升(mL);
          M ———氨基酸i的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol);
          m ———称样量,单位为克(g);
         10———将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数; 100 ———换算系数。
 
附、红鱱鱼分析图谱及做样结果