细胞“磷酸钙转染法”实验过程你们知道吗?

细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、磷酸钙沉淀法、脂质体转染法、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等.
磷酸钙转染法实验过程:

1. 转染前24小时选择状态良好的293T细胞传代， 4×10^6个细胞接种于10cm 细胞培养皿中。

2. 20-24h后，待细胞长至铺满细胞皿底约40-50%的时候，进行转染。

A：取1.5mlEP管，加入质粒：

Lentivirus vector： 10ug

VSVG 质粒 5ug

REV 质粒 5ug

选择超纯水补至100ul。

向上述DNA溶液中加入50ul 2 M CaCl2 溶液，轻轻吹吸混匀。

B．向上述液体中逐滴加入2XHBS，立即吹打混匀在至呈现乳白色。或者选用电动移液枪，一边滴加，一边用电动移液枪进行吹打。不要超过一分钟。

C．将制备的混悬液室温放置10-15分钟。

D．将制备的混悬液轻轻地均匀滴入培养皿，轻轻摇匀后置于培养箱中，6-8h后换液。

因为在吹打混匀液体过程中，每个人的吹打力度不同，因此在制备混合液后可以取载玻片置于显微镜下，滴加一滴混合液，观察些颗粒大小。以便摸索实验的合适条件。

3、转染12至16小时之后给293T细胞换液。

4、转染48小时之后，如果质粒带有荧光标签，可以通过观察荧光判断转染效率。同时收集293T细胞的培养基, 3000rpm离心10分钟去除细胞碎片。

5、将离心后上清进行分装，如果一周内使用，可以临时放于4度冰箱。将其他分装的上清冻存于－80度冰箱中。因为病毒上清反复冻融，会造成病毒的滴度明显下降。