胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒操作方法
胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒操作方法
样本的处理（在样本制备区进行）：
取 n 个灭菌的 .5 mL Eppendorf 管，其中 n 为被检样品与阴性对照的和（阳性对照、阴性对照在试剂盒中已标出），做标记。(注：试剂盒中的阳性对照直接作为 PCR 检测的模板，无需提取核酸)
每管加入 600 ᦕL 裂解液，分别加入被检样本和阴性对照各 200 ᦕL，一份样本换用一个吸头，再加入 200 ᦕL 氯仿，混匀器上振荡混匀 5 s（不能过于强烈，以免产生乳化层，也可以用手颠倒混匀），于 4℃ 2 000 r/min 离心 5 min。
取与 4... 相同数量灭菌的 .5 mL Eppendorf 管，加入 500 ᦕL 异丙醇（-20℃预冷）， 做标记。吸取 4...2 各管中的上清液转移至相应的管中，上清液应至少吸取 500ᦕL，不能吸出中间层，颠倒混匀。
于 4 ℃、2 000 r/min 离心 5 min（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），小心倒去上清，倒置于吸水纸上，沾干液体(不同样品须在吸水纸不同地方沾干)；加入 600 ᦕL 75％ 乙醇，颠倒洗涤。
于 4 ℃、2 000 r/min 离心 0 min（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），小心倒去上清，倒置于吸水纸上，尽量沾干液体（不同样品须在吸水纸不同地方沾干）。
4 000 r/min 离心 0s（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），将管壁上的残余液体甩到管底部，小心倒去上清，用微量加样器将其吸干，一份样本换用一个吸头，吸头不要碰到有沉淀一面，室温干燥 3 min，不能过于干燥，以免 RNA 不溶。
加入 ᦕL DEPC 水，轻轻混匀，溶解管壁上的 RNA，2 000 r/min 离心 5 s，冰上保存备用。提取的 RNA 须在 2 h 内进行 PCR 扩增；若需长期保存须放置-70 ℃冰箱内。
样本的处理（在样本制备区进行）：
取 n 个灭菌的 .5 mL Eppendorf 管，其中 n 为被检样品与阴性对照的和（阳性对照、阴性对照在试剂盒中已标出），做标记。(注：试剂盒中的阳性对照直接作为 PCR 检测的模板，无需提取核酸)
每管加入 600 ᦕL 裂解液，分别加入被检样本和阴性对照各 200 ᦕL，一份样本换用一个吸头，再加入 200 ᦕL 氯仿，混匀器上振荡混匀 5 s（不能过于强烈，以免产生乳化层，也可以用手颠倒混匀），于 4℃ 2 000 r/min 离心 5 min。
取与 4... 相同数量灭菌的 .5 mL Eppendorf 管，加入 500 ᦕL 异丙醇（-20℃预冷）， 做标记。吸取 4...2 各管中的上清液转移至相应的管中，上清液应至少吸取 500ᦕL，不能吸出中间层，颠倒混匀。
于 4 ℃、2 000 r/min 离心 5 min（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），小心倒去上清，倒置于吸水纸上，沾干液体(不同样品须在吸水纸不同地方沾干)；加入 600 ᦕL 75％ 乙醇，颠倒洗涤。
于 4 ℃、2 000 r/min 离心 0 min（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），小心倒去上清，倒置于吸水纸上，尽量沾干液体（不同样品须在吸水纸不同地方沾干）。
4 000 r/min 离心 0s（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），将管壁上的残余液体甩到管底部，小心倒去上清，用微量加样器将其吸干，一份样本换用一个吸头，吸头不要碰到有沉淀一面，室温干燥 3 min，不能过于干燥，以免 RNA 不溶。
加入 ᦕL DEPC 水，轻轻混匀，溶解管壁上的 RNA，2 000 r/min 离心 5 s，冰上保存备用。提取的 RNA 须在 2 h 内进行 PCR 扩增；若需长期保存须放置-70 ℃冰箱内。
