腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶使用方法
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶测定原理
AGP催化的逆向反应生成GP，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液：液体30mL×瓶，4℃保存;
试剂一：液体0mL×瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×支，4℃保存；临用前加入250μL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍4℃保存；
试剂三：粉剂×瓶，4℃保存；临用前加入2mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍4℃保存；
试剂四：粉剂×瓶，4℃保存；临用前加入3mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍4℃保存；
试剂五：粉剂×瓶，-20℃保存；临用前加入3mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂六：粉剂×支，-20℃保存；临用前加入250μL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存；
试剂七：粉剂×支，-20℃保存；临用前加入250μL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存；
粗酶液制备
称取约0.g组织加入mL提取液，冰浴中匀浆。0000g ，4℃离心0min，取上清，置冰上待测。AGP活性计算
、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生nmol NADPH定义为一个酶活性单位。
AGP活性（U/mg prot）＝反应总体积（700μL ）÷样本体积（20μL ）÷反应时间(2min)÷NADPH消光系数（6.22×0-3）×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）=283×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）。
此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
AGP活性（U/g 鲜重）=反应总体积（700μL ）÷样本体积（20μL ）÷反应时间(2min)÷NADPH消光系数（6.22×0-3）×ΔA ÷样本鲜重(g/mL) =283×ΔA÷样本鲜重(g/mL)
AGP催化的逆向反应生成GP，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液：液体30mL×瓶，4℃保存;
试剂一：液体0mL×瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×支，4℃保存；临用前加入250μL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍4℃保存；
试剂三：粉剂×瓶，4℃保存；临用前加入2mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍4℃保存；
试剂四：粉剂×瓶，4℃保存；临用前加入3mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍4℃保存；
试剂五：粉剂×瓶，-20℃保存；临用前加入3mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂六：粉剂×支，-20℃保存；临用前加入250μL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存；
试剂七：粉剂×支，-20℃保存；临用前加入250μL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存；
粗酶液制备
称取约0.g组织加入mL提取液，冰浴中匀浆。0000g ，4℃离心0min，取上清，置冰上待测。AGP活性计算
、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生nmol NADPH定义为一个酶活性单位。
AGP活性（U/mg prot）＝反应总体积（700μL ）÷样本体积（20μL ）÷反应时间(2min)÷NADPH消光系数（6.22×0-3）×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）=283×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）。
此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
AGP活性（U/g 鲜重）=反应总体积（700μL ）÷样本体积（20μL ）÷反应时间(2min)÷NADPH消光系数（6.22×0-3）×ΔA ÷样本鲜重(g/mL) =283×ΔA÷样本鲜重(g/mL)
