DNA扩增试剂盒说明书
DNA 扩增试剂盒说明书
【试剂名称】 DNA 扩增试剂盒
【 目 录 号 】 051011M
【产品保存】 -18~-25℃，有效期为 12 个月
【包装规格】 48 测试
【产品简介】本产品为 DNA 扩增试剂盒，可用于人源性、动植物源性病原体及其他细菌、真菌、病毒、寄生虫等核酸的快速扩增。本试剂
盒通过 Bst 聚合酶、四种核苷酸单体（dNTPs）、引物等成分的作用，在恒温条件下（60～65℃）快速、特异地完成核酸扩增，通过
仪器判读结果。
【主要组成成份】
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组分名称 |
规格Χ数量 |
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反应液 RM-SCI |
630 μlΧ1 支 |
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Bst 聚合酶 Bst-SCI |
55 μl×1 支 |
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荧光染料 CS-SCI |
40 μl×1 支 |
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密封液 OIL-SCI |
1 mlΧ1 支 |
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超纯水 DW-SCI |
1 mlΧ1 支 |
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对照引物 PM（引物混合物） |
20 μl×1 支 |
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PM-SCI |
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阳性对照 PG-SCI |
20 μl×1 支 |
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阴性对照 NG-SCI |
20 μl×1 支 |
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说明书 |
1 份 |
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使用指南实时荧光法
【适用仪器】ZYD-S1，荧光 PCR 仪（ABI 7500，CFX 96，Mx 3005P，LineGene 9600），Deaou-308c，Genie II 等扩增仪。
【检验方法】
1． 反应体系的配制。（在试剂准备区进行，冰上操作）
推荐扩增反应体系（见表 1，以 25 μl 为例）
表 1 反应体系参考
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组分名称 |
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加入量 |
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建议加入量 |
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反应液 RM-SCI |
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12.5 μl |
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12.5 |
μl |
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内引物（FIP/BIP） |
（终浓度） |
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0.4～1.6 μM |
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1.0 |
μl |
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外引物（F3/B3） |
（终浓度） |
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0.1～0.2 μM |
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(引物 PM) |
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环引物（LF/LB）(可选) （终浓度） |
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0.1～0.8 μM |
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Bst 聚合酶 |
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1.0 μl |
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1.0 |
μl |
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荧光染料 |
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0.5 μl |
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0.5 |
μl |
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DNA 模板 |
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1～100 ng |
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2.0 |
μl |
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加超纯水至 |
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25 μl |
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25 μl |
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上述试剂混匀后，加入一滴密封液，混匀离心，盖紧管盖。
2．LAMP 扩增反应。（在扩增区进行）
将上述反应管放入 60～65℃的扩增仪内，反应 20～60 min 后取出反应管（反应温度及时间根据具体情况而定；试剂盒对照品
最佳扩增温度为 63℃，最佳反应时间为 60 min）。
使用荧光 PCR 仪，请选用 FAM 通道，反应程序设置可参考图 1，将 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作为一个循环，于 63℃ 45 s 处收
集荧光信号。使用其他仪器请按照仪器说明书操作。
图 1 荧光 PCR 仪反应程序设置图
3．结果检测
若有“S”型扩增曲线，则判断为阳性（有核酸扩增），若无“S”型扩增曲线，则判断为阴性（无核酸扩增），见图 2。
图 2 检测结果示意图【注意事项】
实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，建议使用带滤芯的吸头。
试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，建议使用前离心 30 秒。
实验请按实验室区操作，试剂配制等步骤请严格按照说明书的要求在冰上操作。
阳性对照品最适扩增温度为 63℃，最适反应时间为 60 min，提高或降低反应温度将影响扩增效率，延长扩增时间可能会出现非特异性扩增。
反应结束后，开盖易造成气溶胶污染，切忌开盖。
不同批号试剂请勿混合使用，请在有效期内使用试剂盒。
本试剂盒仅供科研使用，请勿用于其他用途。
