pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白)
pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白)
|
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
|
YJ2707 |
pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) |
1μg |
产品简介：
- pCMV-N-EGFP是上海一基自行研发的哺乳动物细胞表达质粒，用于表达N端含EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein, 增强绿色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个EGFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有EGFP标签的融合蛋白。利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用EGFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
- pCMV-N-EGFP质粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide CMV promoter
T3 promoter and T3 primer binding site
EGFP
Multiple cloning site
T7 promoter and T7 primer binding site
SV40 polyA signal
f1 origin of ss-DNA replication bla promoter
SV40 promoter
Neomycin/kanamycin resistance ORF
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal pUC origin
Ø pCMV-N-EGFP质粒(5003bp)的图谱如下：
Position
1-602
620-639
677-1393
1394-1483 1503-1524
1536-1919 2057-2363
2388-2512
2532-2870
205-3696
3697-4155
4284-4951
Ø pCMV-N-EGFP的多克隆位点的详细图谱如下：
SacI EGFP
651 GAGCTCTAGC GCTACCGGTC GCCACCATGG TGAGCAAGGG CGAGGAGCTG
CTCGAGATCG CGATGGCCAG CGGTGGTACC ACTCGTTCCC GCTCCTCGAC
701 TTCACCGGGG TGGTGCCCAT CCTGGTCGAG CTGGACGGCG ACGTAAACGG
AAGTGGCCCC ACCACGGGTA GGACCAGCTC GACCTGCCGC TGCATTTGCC
751 CCACAAGTTC AGCGTGTCCG GCGAGGGCGA GGGCGATGCC ACCTACGGCA
GGTGTTCAAG TCGCACAGGC CGCTCCCGCT CCCGCTACGG TGGATGCCGT
801 AGCTGACCCT GAAGTTCATC TGCACCACCG GCAAGCTGCC CGTGCCCTGG
TCGACTGGGA CTTCAAGTAG ACGTGGTGGC CGTTCGACGG GCACGGGACC
851 CCCACCCTCG TGACCACCCT GACCTACGGC GTGCAGTGCT TCAGCCGCTA
GGGTGGGAGC ACTGGTGGGA CTGGATGCCG CACGTCACGA AGTCGGCGAT
901 CCCCGACCAC ATGAAGCAGC ACGACTTCTT CAAGTCCGCC ATGCCCGAAG
GGGGCTGGTG TACTTCGTCG TGCTGAAGAA GTTCAGGCGG TACGGGCTTC
951 GCTACGTCCA GGAGCGCACC ATCTTCTTCA AGGACGACGG CAACTACAAG
CGATGCAGGT CCTCGCGTGG TAGAAGAAGT TCCTGCTGCC GTTGATGTTC
1001 ACCCGCGCCG AGGTGAAGTT CGAGGGCGAC ACCCTGGTGA ACCGCATCGA
TGGGCGCGGC TCCACTTCAA GCTCCCGCTG TGGGACCACT TGGCGTAGCT
1051 GCTGAAGGGC ATCGACTTCA AGGAGGACGG CAACATCCTG GGGCACAAGC
CGACTTCCCG TAGCTGAAGT TCCTCCTGCC GTTGTAGGAC CCCGTGTTCG
1101 TGGAGTACAA CTACAACAGC CACAACGTCT ATATCATGGC CGACAAGCAG
ACCTCATGTT GATGTTGTCG GTGTTGCAGA TATAGTACCG GCTGTTCGTC
1151 AAGAACGGCA TCAAGGTGAA CTTCAAGATC CGCCACAACA TCGAGGACGG
TTCTTGCCGT AGTTCCACTT GAAGTTCTAG GCGGTGTTGT AGCTCCTGCC
1201 CAGCGTGCAG CTCGCCGACC ACTACCAGCA GAACACCCCC ATCGGCGACG
GTCGCACGTC GAGCGGCTGG TGATGGTCGT CTTGTGGGGG TAGCCGCTGC
1251 GCCCCGTGCT GCTGCCCGAC AACCACTACC TGAGCACCCA GTCCGCCCTG
CGGGGCACGA CGACGGGCTG TTGGTGATGG ACTCGTGGGT CAGGCGGGAC
1301 AGCAAAGACC CCAACGAGAA GCGCGATCAC ATGGTCCTGC TGGAGTTCGT
TCGTTTCTGG GGTTGCTCTT CGCGCTAGTG TACCAGGACG ACCTCAAGCA
BamHI HindIII
1351 GACCGCCGCC GGGATCACTC TCGGCATGGA CGAGCTGTAC AAGGGATCCA
CTGGCGGCGG CCCTAGTGAG AGCCGTACCT GCTCGACATG TTCCCTAGGT
|
1401 |
PstI |
EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI |
XbaI SpeI |
|
AGCTTCTGCA GGAATTCGAT ATCGTCGACA GATCTCTCGA GTCTAGAACT | |||
|
|
TCGAAGACGT CCTTAAGCTA TAGCAGCTGT CTAGAGAGCT CAGATCTTGA | ||
|
1451 |
ApaI |
|
|
|
AGTGGGCCCG GTACCTTAAT TAATTAAGGT ACC |
| ||
|
|
TCACCCGGGC CATGGAATTA ATTAATTCCA TGG |
| |
|
Ø pCMV-N-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-EGFP)包括： |
BbsI | |||||||||||
|
AclI |
AflII |
AhdI |
AscI |
AsiSI |
BaeI | |||||||
|
BbvCI |
BlpI |
BmgBI |
BsiWI |
BsmBI |
BspEI |
BspQI | ||||||
|
BssHII |
BstEII |
BstXI |
BstZ17I |
EarI |
EcoNI |
FseI | ||||||
|
NotI |
NruI |
PflMI |
PmeI |
PmlI |
PpuMI |
PshAI | ||||||
|
PspXI |
SacII |
SapI |
SbfI |
ScaI |
SgrAI |
SmaI | ||||||
|
SwaI |
TspMI |
XcmI |
XmaI |
XmnI |
|
| ||||||
|
Ø pCMV-N-EGFP中的单酶切位点（Restriction enzymes that cut pCMV-N-EGFP once）包括： |
1454 | |||||||||||
|
NdeI |
CA`TA,TG |
240 |
ApaI |
G,GGCC`C | ||||||||
|
SnaBI |
TAC|GTA |
346 |
PvuI |
CG,AT`CG |
1534 | |||||||
|
CspCI |
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` |
380 |
BclI |
T`GATC,A |
1690 | |||||||
|
NheI |
G`CTAG,C |
597 |
MfeI |
C`AATT,G |
1783 | |||||||
|
2 / 4 YJ2707 pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) |
|
|
400-1683301/800-8283301 |
上海一基/Beyotime | ||||||||
|
G,CTAG`C |
597 |
HpaI |
GTT|AAC |
1796 | |
|
Eco53kI |
GAG|CTC |
653 |
MluI |
A`CGCG,T |
1919 |
|
SacI |
G,AGCT`C |
651 |
BsaXI |
,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` |
2080 |
|
AfeI |
AGC|GCT |
660 |
DraIII |
CAC,NNN`GTG |
2146 |
|
AgeI |
A`CCGG,T |
664 |
SfiI |
GGCCN,NNN`NGGCC |
2805 |
|
BcgI |
,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` |
765 |
StuI |
AGG|CCT |
2854 |
|
BsrGI |
T`GTAC,A |
1386 |
ClaI |
AT`CG,AT |
2873 |
|
BamHI |
G`GATC,C |
1394 |
BspDI |
AT`CG,AT |
2873 |
|
HindIII |
A`AGCT,T |
1400 |
EagI |
C`GGCC,G |
2939 |
|
PstI |
C,TGCA`G |
1406 |
KasI |
G`GCGC,C |
3032 |
|
EcoRI |
G`AATT,C |
1412 |
NarI |
GG`CG,CC |
3033 |
|
EcoRV |
GAT|ATC |
1420 |
SfoI |
GGC|GCC |
3034 |
|
SalI |
G`TCGA,C |
1424 |
PluTI |
G,GCGC`C |
3032 |
|
AccI |
GT`MK,AC |
1425 |
MscI |
TGG|CCA |
3115 |
|
BglII |
A`GATC,T |
1430 |
PflFI |
GACN`N,NGTC |
3151 |
|
BsoBI |
C`YCGR,G |
1436 |
Tth111I |
GACN`N,NGTC |
3151 |
|
PaeR7I |
C`TCGA,G |
1436 |
BsrDI |
GCAATG,NN` |
3264 |
|
AvaI |
C`YCGR,G |
1436 |
RsrII |
CG`GWC,CG |
3549 |
|
XhoI |
C`TCGA,G |
1436 |
BstBI |
TT`CG,AA |
3715 |
|
XbaI |
T`CTAG,A |
1442 |
BsaI |
GGTCTCN`NNNN, |
4022 |
|
SpeI |
A`CTAG,T |
1448 |
ApaLI |
G`TGCA,C |
4637 |
|
PspOMI |
G`GGCC,C |
1454 |
PciI |
A`CATG,T |
4951 |
pCMV-N-EGFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
N-EGFP primer (1284-1303): 5'-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3'
T7 primer (1503-1524): 5'-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3'
- pCMV-N-EGFP的全序列信息请参考上海一基网站上该质粒的信息。
- pCMV-N-EGFP质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。
图1. pCMV-N-EGFP质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。
包装清单：
|
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
|
YJ2707 |
pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) |
1μg |
|
— |
说明书 |
1份 |
保存条件：
-20ºC保存。
注意事项：
- 本质粒未经上海一基书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
- 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
- pCMV-N-EGFP质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
