细胞分化软骨细胞阿尔新蓝（alcian blue）染色试剂盒使用说明

细胞分化软骨细胞阿尔新蓝（alcian blue）染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI细胞分化软骨细胞阿尔新蓝（alcian blue）染色试剂是一种旨在使用阳离子染料阿尔新蓝，使软骨组织上蛋白多糖聚糖染色，呈现深蓝色，来分析固定处理的细胞样本中软骨生成状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于动物细胞分化和软骨生成的检测。广泛用于软骨细胞或组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

间质干细胞（mesenchymal stem cell）分化产生脂肪细胞（adipocyte）、成骨细胞（osteoblast）、肌细胞（myocyte和软骨细胞（chondrocyte）。软骨细胞及其细胞外基质（extracellular matrix）构成软骨组织（cartilage tissue），其含有硫酸软骨素（chondroitin sulfate）和硫酸角质素（karatan sulfate）等为主要成分的蛋白多糖（proteoglycan）聚糖（aggrecan），成为软骨生成（chondrogenesis）的标记（indicator）。阿尔新蓝（alcian blue）是一种阳离子含铜染料，使酸性粘多糖（mucopolysaccharide）类蛋白聚糖染色，呈现深蓝色。 

产品内容

YIJI清理液（Reagent A）  毫升

YIJI固着液（Reagent B）  毫升

YIJI染色液（Reagent C）  毫升

YIJI去色液（Reagent D）  毫升

产品说明书  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent C），避免光照；YIJI去色液（Reagent D）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月

用户自备

核固红复染试剂盒（YIJI40011）：用于常规染色后复染

小型染色缸：用于细胞染色操作

光学显微镜：用于细胞染色后观察分析

实验步骤

操作一：细胞载玻片染色

• 样本固着处理
• 取出待测的细胞载玻片 
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent A）在载玻片上，铺满整个样品表面
• 小心移去载玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升YIJI固着液（Reagent B），铺满整个样品表面
• 室温下，孵育60分钟
• 小心移去载玻片上的YIJI固着液（Reagent B）
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent A），清洗样品表面
• 小心移去载玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 重复实验步骤7至8一次

二、样本染色处理

• 小心加上xx微升YIJI染色液（Reagent C），铺满整个载玻片样品表面
• 室温下，孵育60分钟，避免光照
• 小心移去载玻片上的YIJI染色液（Reagent C）
• 室温下，小心将载玻片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去载玻片上的YIJI清理液（Reagent A）

三、 （选择步骤）样本复染处理

• 小心加上xx微升YIJI去色液（Reagent D）在载玻片上，铺满整个载玻片样品表面
• 室温下孵育3分钟（注意：观察背景蓝色变化，避免过度褪色）
• 小心移去载玻片上的YIJI去色液（Reagent D）
• 室温下，小心将载玻片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去载玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 样本复染处理（核固红）
• 放上盖玻片或封片
• 即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现深蓝色，背景呈现浅蓝色调（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）

操作二：24孔细胞培养板染色

一、样本固着处理

1．小心抽去24孔细胞培养板里的培养液

2．每孔加入xx微升YIJI清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面

3．小心抽去每孔里的YIJI清理液（Reagent A）

4．每孔加入xx微升YIJI固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面

5．在室温下孵育60分钟

6．小心抽去YIJI固定液（Reagent B）

7．每孔加入xx微升YIJI清理液（Reagent A），清洗细胞表面

8．小心抽去YIJI清理液（Reagent A）

9．重复实验步骤7至8两次

二、样本染色处理

• 小心加上xx微升YIJI染色液（Reagent C），覆盖整个生长表面
• 室温下，孵育60分钟，避免光照
• 小心抽去YIJI染色液（Reagent C）
• 小心加入xx微升YIJI清理液（Reagent A）
• 室温下孵育2分钟
• 小心抽去YIJI清理液（Reagent A）

三、 （选择步骤）样本复染处理

• 小心加上xx微升YIJI去色液（Reagent D），覆盖整个生长表面
• 室温下孵育3分钟（注意：观察背景蓝色变化，避免过度褪色）
• 小心抽去YIJI去色液（Reagent D）
• 小心加入xx微升YIJI清理液（Reagent A）
• 室温下孵育2分钟
• 小心抽去YIJI清理液（Reagent A）
• 样本复染处理（核固红）
• 即刻在一般光学显微镜下观察：性细胞呈现深蓝色，背景呈现浅蓝色调（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）

注意事项

• 本产品为50次操作
• 操作时，须带手套
• YIJI去色液（Reagent D）具有腐蚀性，注意操作安全
• 所有操作在室温下进行
• 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
• 样品去色避免过度
• 建议使用YIJI核固红复染试剂盒（YIJI40011），增强染色对比度
• 细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 
• 本公司提供系列软骨组织细胞染色试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰