胶原蛋白提取与检测方法

前言：胶原蛋白是一种天然高分子化合物，具有一定的凝胶强度，乳化性、低黏度性、生物相容性、吸水和保湿性等，广泛应用于食品、医药保健品、化妆品等行业中。胶原蛋白主要存在于动物皮、骨、软骨、牙齿、肌腱、韧和血管中。

原料检测及胶原蛋白提取方法：

1、原料成分基础检测   水分测定--直接干燥法  灰分测定--550℃灰分法  粗蛋白检测--凯氏定氮法  脂肪测定--索氏抽提法

2、鱼尾预处理，去除残肉、硬骨、脂肪，等谁清洗，有机溶剂去除脂溶性色素，脱钙、除蛋白后，冷冻备用。

3、胶原蛋白提取   4℃下胶原蛋白提取最佳工艺为盐酸胍浓度3mol/l、胃蛋白酶添加量3.0%、提取时间72h、料液比1:50（g/ml）、提取次数2次。纯化：在以上粗胶原蛋白中加入NaCI至溶液浓度终浓度为3.0mol/l，同时析出絮状沉淀，4℃，4000r/min离心15min，重复两次，透析，冷冻干燥，即得。

胶原蛋白含量检测方法：

1、紫外可见分光光度法

   往封盖的试管中加入样品4-6mg，加入6mol/l盐酸溶液5ml，在110℃分解24h后，蒸馏水定容到25ml，在40℃下用旋蒸除去水和盐酸，添加30ml蒸馏水溶解，吸取0.5ml测定吸光度，按表曲算出浓度。

2、聚丙烯酰胺电泳法

采用垂直板电泳，先配置2.5mg/ml的胶原蛋白溶液，与样品处理液混合，在沸水中加热4min，冷却备用，用7.5%丙烯酰胺对胶原蛋白进行电泳分析，采用考马斯亮蓝R250染色，体积分数为10%醋酸和30%甲醇脱色。

3、液相色谱法

      鲫鱼组织盐酸110℃水解18h，Dns-Ci衍生，然后以甲醇和四氢呋喃-甲醇-0.05mol/l乙酸钠溶液为流动相，在反相C18柱上进行分离。在20-400μg/ml范围内关系良好。