报告基因分类及优缺点介绍

报告基因（reporter gene）是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，其表达产物非常容易被鉴定。把它的编码序列和基因调节序列相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。

作为报告基因必须具备的条件：

（1）全序列已测定

（2）表达产物在手提细胞中不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物

（3）其表达产物能够进行定量测定

报告基因的种类很多，根据对其表达产物的分析检测方法的不同，可将其分为体外报告基因和体内报告基因。前者的分析需要在含有报告分子的细胞裂解液或细胞、组织培养液（分泌型报告基因）中进行报告分子的定量。较典型的有氯霉素乙酰基转移酶基因（CAT）、人生长激素基因（hGH）及分泌型碱性磷酸酶基因（SEAP）等。后者的分析可以在活的细胞或组织中，或在已经组化固定的组织或细胞中进行。较典型的如绿色荧光蛋白基因（GFP）。而β-半乳糖苷酶基因（β-Gal）和萤火虫荧光素酶基因既可以在体外分析也可以在体内分析。

常用的报告基因系统：

√ 半乳糖苷酶报告系统

√ 荧光素酶报告系统

√ 荧光蛋白报告系统：

绿色荧光蛋白（GFP）：

    可溶性蛋白，性质稳定；

    荧光基团相当明亮；

    荧光在活细胞中即可观察，不需要固定和组织加工；

    GFP基团和目的基因做成融合蛋白后，可以通过转染的方法在细胞中稳定表达；

    表达GFP融合物的细胞能够在生活状态进行实验和检测。