使用Ostro样品制备板结合LC-MS/MS对牛奶中的兽药多残留进行筛查
简介
Ostro样品制备板可对生物样品中的碱性药物和相关化合物进行简单、快速的LC-MS测定。Ostro样品板为液液萃取、蛋白质沉淀、过滤以及后续从最终萃取物中清除磷脂提供了方便。本文运用Ostro样品板对牛奶中的兽药多残留进行了筛查。使用此样品板只需简单的几个步骤即可有效沉淀蛋白质并除去潜在的干扰物质，从而完成牛奶样品的制备。萃取的样品通过样品板时，蛋白质通过过滤被去除，而磷脂干扰物则通过被保留在专利的吸附剂上被去除。完成简单的样品制备步骤之后，使用UPLC-MS/MS对复溶样品进行分析。为了证明本方法的适用性，我们从主要的兽药种类中选择了具有代表性的化合物，包括四环素、氟喹诺酮、磺胺类、大环内酯、β-内酰胺和β-肾上腺素能药物。
样品制备
将125 μL牛奶转移至样品板孔中（样品体积不得大于125 μL）。加入375 μL 0.2%甲酸的乙腈（ACN）溶液。抽吸几次以使其充分混合。洗脱至收集板中。加入100 μ L 200 mM甲酸铵的甲醇/ACN（50:50）溶液，充分混合。蒸干并复溶于100 μL ACN/25 mM甲酸铵水溶液（25:75）中。图1展示了使用Ostro样品板时的SPE典型设置。
结果与讨论
多残留分析
Ostro样品板的结果与之前发表的方法1相当。然而，Ostro样品板操作耗时更少，并且更适用于高通量分析。使用此方法，一般分析人员可在几分钟内制备10个甚至更多的样品，而采用之前的方法则需几个小时。图2显示了恩诺沙星（10 μg/ L）基质匹配标准品的典型LC-MS色谱图。尽管对于大部分其它化合物来说，使用该方法分析时表现出相似的分析性能，但仍然无法对10 μg/ L浓度的金霉素、土霉素和林可霉素进行定量分析。最近研发了一种四环素的替代方法2。表2示出了观察到的多残留牛奶分析的回收率数据。
磷脂去除
牛奶中含有大量的磷脂，约占其总脂肪含量的1% 3。在LC分离中，这些磷脂会直接干扰后洗脱的化合物。此外，结果表明磷脂残留的累积会使反相LC分离的性能变差4。图3展示了采用为鉴定磷脂而选择的MRM通道（m/z184>184）对牛奶样品进行分析的UPLC-MS/MS色谱图。下图展示了使用Ostro样品板处理牛奶样品获得的结果。上图为采用蛋白质沉淀（未经SPE纯化）获得的结果。Ostro样品板可有效去除超过98%的磷脂。
结论
■ 展示了使用Ostro样品制备板从牛奶中快速萃取多种兽药。
■ 除四环素外，该方法对其它所有种类的被测化合物均表现出良好的筛查分析性能。
■ 使用Ostro直通式样品制备板可有效去除牛奶萃取物中的几乎全部磷脂。
参考文献
1. Optimized Extraction and Cleanup Protocols for LC-MS/MS Multi-Residue Determination of Veterinary Drugs in Edible Muscle Tissues, Waters Application Note 720004144en
2. HPLC/UV Determination of Tetracyclines in Milk Using Mixed-Mode SPE and eXtended
Performance [XP] 2.5 μm Columns, Waters Application Note 720004582en
3. Contarini, G and Povolo, M., Phospholipids in Milk Fat: Composition, Biological and Technological Significance, and Analytical Strategies, Int. J. Mol. Sci, 14(2), 2808–2831(2013)
4. Eliminating Phospholipids in Drug Discovery Extractions Using a Fast, Generic Sample Clean-up Method, Waters Application Note 720004046en
