高效液相色谱法检测牛奶，奶粉等产品中黄曲霉毒素M1操作规程
1. 仪器
高效液相色谱仪配荧光检测器，震荡器（或高速搅拌器），高速离心机
2. 试剂与试液
色谱甲醇，蒸馏水，乙腈+水（25+75），石油醚，2.5 10%乙腈， 氢氧化钠溶液（0.5mol/L），玻璃纤维滤纸（PriboFast免疫亲和柱免费赠送）
3. 测定法
本法系用高效液相色谱法（GB/T 18980-2003）测定牛奶，奶粉等产品中的黄曲霉毒素M1，除另有规定外，按下列方法测定。
3.1 色谱条件
色谱柱：C18柱，150×4.6mm，5um
检测器：荧光检测器；激发波长365nm，发射波长435nm；
流动相：乙腈-水（25：75）
流 速：1.0ml/min
进样量：20ul
柱 温：室温
3.2 标准品溶液的配制
取黄曲霉毒素M1标准品，用乙腈稀释成0.5ug/ml的标准储备液。根据使用需要，准确吸取10μl、20μl、50μl、100μl、200μl的黄曲霉毒素标准储备液，置5ml的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，配成相当于1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的标准工作液，即得。
3.3 样品前处理
3.3.1牛奶
将100mL牛奶水浴加热至40℃；
4000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用；
3.3.2乳粉和粉状婴幼儿配方食品
称取10g奶粉样品，将100mL50℃水多次少量加入，搅拌，使奶粉充分溶解；
6000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用；
3.3.3发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)
称取60 g混匀的试样，用0.5 mol/L 的氢氧化钠溶液在酸度计指示下调pH至7.4；
用高速均质器在 9500 转/分钟，高速匀浆5 min
水浴加热至40℃；
4000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用
3.3.4干酪
称取经切细、过10目圆孔筛混匀的试样5g置于50 mL离心管中，加2 mL水和30 mL甲醇；
用高速均质器在 9500r/分钟，高速匀浆5 min；
超声提取30 min；
在6000r/分钟下离心15 min，收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。
在分液漏斗中加入30 mL石油醚，振摇2 min；
待分层后，将下层移于50 mL烧杯中，弃去石油醚层。
重复用石油醚提取2次；。
将下层溶液移到100 mL圆底烧瓶中，减压浓缩至约2 mL；
浓缩液倒入离心管中，烧瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗涤，洗涤液一并倒入50 mL离心管中；
加水稀释至约50 mL，在6000 转/分钟下离心 5 min，上清液供净化处理。
3.3.5奶油
称取5g试样，置于50 mL烧杯中；
用20 mL石油醚将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。
加20 mL水和30 mL甲醇，振荡30 min后，将全部液体移于分液漏斗中；
待分层后，将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪中减压浓缩至约5 mL，加水稀释至约50mL，供净化处理。
3.4 供试品溶液的制备
3.4.1 PriboFast® 黄曲霉毒素M1免疫亲和柱的操作
将免疫亲和柱连接于50.0mL玻璃注射器下。准确移取50.0mL净化溶液注入玻璃注射器；
将空气压力泵与注射器连接，调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2～3mL空气通过柱体；
更换10ml注射器与亲和柱连接，在注射器中加入10ml水，调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。
准确加入4mL色谱级乙腈洗脱，流速为1 mL/min～2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。（建议将乙腈的量分2-4次加入。每次加入后，要让甲醇充分浸泡柱子里的凝胶2分钟。洗脱后的乙腈溶液，最好是水浴30℃加热吹近干。用10%乙腈定容后上液相）
3.5 测定
精密量取1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的标准工作液各20ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。另精密量取供试品溶液20ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素M1的量，计算，即得。
1.本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。
2.残留有黄曲霉毒素M1的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有10%氯酸钠溶液）内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。
技术咨询请联系：北京泰乐祺科技有限公司
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2012-4-11 12:40:00
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2012-4-11 12:40:00
匿名 (111.194.232.89)
北京泰乐祺科技有限公司专业提供致病菌、生物毒素、转基因以及药物残留等检测技术与产品服务，是国内最专业的真菌毒素检测产品和分析服务的公司，不仅提供全系列的真菌毒素液体和固体标准品，前处理用的净化柱和免疫亲和柱、试剂盒等，而且提供快速准确的分析检测业务。 分析检测的霉菌毒素种类： ■黄曲霉毒素类：黄曲霉毒素B1，黄曲霉毒素B2，黄曲霉毒素G1，黄曲霉毒素G2，黄曲霉毒素M1，黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2总量 ■ A/B型单端孢霉烯族化合物: T-2毒素，HT-2毒素，蛇形毒素(Diacetoxyscirpenol) ，二醋酸麃草镰刀菌烯醇(Neosolaniol)，呕吐毒素(DON)，3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3 Acetyl DON)，5-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15 Acetyl DON)，雪腐镰刀菌烯醇(Nivalenol)，镰刀菌烯酮-X(Fusarenon-X) ■ 伏马毒素类：伏马毒素B1(fumonisin B1)，伏马毒素B2(fumonisin B2) ■ 玉米赤霉烯酮(zearalenone)，赭曲霉毒素A(ochratoxin A) ■ 桔青霉素(Citrinin)，展青霉素(patulin) 采用技术手段： 高效液相色谱法、薄层层析TLC法、酶联免疫法 提供霉菌毒素检测服务的样品种类： ■ 原粮类(如谷物、玉米、大豆等) ■ 饲料及原料类(如豆粕、玉米、宠物食品) ■ 食品原料(包括淀粉 大米蛋白 玉米蛋白 谷朊粉 粮油 面粉 大豆制品等) ■ 粮食及其加工品 食品、饲料成分分析： 可为酿酒、果汁、食品和饲料工业提供有机酸、糖类醇类物质检测服务。 ■ 有机酸定量分析：包括苹果酸、柠檬酸、乙酸、乳酸、丙酮酸等。 ■ 糖和醇类定量分析：主要有乳糖、D-半乳糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、乙醇、甘露醇、甘油等。 ■ 其他物质分析：氨、尿素、酮体、肉碱、膳食纤维、亚硫酸盐、二氧化硫、重金属铁铜。 提供真菌毒素的检测培训： 培训内容包括：高效液相色谱法、酶联免疫法、薄层层析TLC法。 培训费用：仅收取耗材费用(学员可以自带2个样品)。 公司网址： www.rapid-bio.com 公司邮箱： rapidtest@163.com 联 系 人：刘红兵 联系电话：010-633380700 13311089404
2012-4-1 8:44:00
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2012-4-1 8:44:00
匿名 (111.194.240.220)
Pribolab 是面向全球的专业霉菌毒素检测解决方案服务商，北京泰乐祺科技有限公司负责Pribolab的PriboFast霉菌毒素检测系列产品在中国区市场的宣传和推广,包括霉菌毒素免疫亲和柱,霉菌毒素酶联免疫试剂盒,霉菌毒素多功能净化柱,霉菌毒素标准品和质控样品,黄曲霉毒素光化学柱后衍生装置等产品和技术服务。 2012年3月27，28日在第五届食品安全高峰论坛（国家会议中心）29号展位恭候您莅临我公司展位参观、指导和洽谈合作北京泰乐祺科技有限公司 www.rapid-bio.com 联系电话：010－63395349 63380700 13311089404 如有更多产品需求与查询,请及时接洽：www.rapid-bio.com 或在我公司查询主页客户留言处（http://www.rapid-bio.com/NetBook.asp#）留下您的查询内容，我们即会在当天为您作出回复。 如您对检测霉菌毒素有任何技术问题或对方法开发有疑问可来电咨询我们 ！
2012-3-23 13:43:00
Pribolab 是面向全球的专业霉菌毒素检测解决方案服务商，北京泰乐祺科技有限公司负责Pribolab的PriboFast霉菌毒素检测系列产品在中国区市场的宣传和推广,包括霉菌毒素免疫亲和柱,霉菌毒素酶联免疫试剂盒,霉菌毒素多功能净化柱,霉菌毒素标准品和质控样品,黄曲霉毒素光化学柱后衍生装置等产品和技术服务。 2012年3月27，28日在第五届食品安全高峰论坛（国家会议中心）29号展位恭候您莅临我公司展位参观、指导和洽谈合作北京泰乐祺科技有限公司 www.rapid-bio.com 联系电话：010－63395349 63380700 13311089404 如有更多产品需求与查询,请及时接洽：www.rapid-bio.com 或在我公司查询主页客户留言处（http://www.rapid-bio.com/NetBook.asp#）留下您的查询内容，我们即会在当天为您作出回复。 如您对检测霉菌毒素有任何技术问题或对方法开发有疑问可来电咨询我们 ！
2012-3-23 13:43:00
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北京泰乐祺科技有限公司专业提供致病菌、生物毒素、转基因以及药物残留等检测技术与产品服务，是国内最专业的真菌毒素检测产品和分析服务的公司，不仅提供全系列的真菌毒素液体和固体标准品，前处理用的净化柱和免疫亲和柱、试剂盒等，而且提供快速准确的分析检测业务。 分析检测的霉菌毒素种类： ■黄曲霉毒素类：黄曲霉毒素B1，黄曲霉毒素B2，黄曲霉毒素G1，黄曲霉毒素G2，黄曲霉毒素M1，黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2总量 ■ A/B型单端孢霉烯族化合物: T-2毒素，HT-2毒素，蛇形毒素(Diacetoxyscirpenol) ，二醋酸麃草镰刀菌烯醇(Neosolaniol)，呕吐毒素(DON)，3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3 Acetyl DON)，5-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15 Acetyl DON)，雪腐镰刀菌烯醇(Nivalenol)，镰刀菌烯酮-X(Fusarenon-X) ■ 伏马毒素类：伏马毒素B1(fumonisin B1)，伏马毒素B2(fumonisin B2) ■ 玉米赤霉烯酮(zearalenone)，赭曲霉毒素A(ochratoxin A)提供真菌毒素的检测培训： 培训内容包括：高效液相色谱法、酶联免疫法、薄层层析TLC法。 培训费用：仅收取耗材费用(学员可以自带2个样品)。 公司网址： www.rapid-bio.com 公司邮箱： rapidtest@163.com 联 系 人：刘红兵 联系电话：010-633380700 13311089404 ■ 桔青霉素(Citrinin)，展青霉素(patulin) 采用技术手段： 高效液相色谱法、薄层层析TLC法、酶联免疫法
2012-3-16 10:35:00
北京泰乐祺科技有限公司专业提供致病菌、生物毒素、转基因以及药物残留等检测技术与产品服务，是国内最专业的真菌毒素检测产品和分析服务的公司，不仅提供全系列的真菌毒素液体和固体标准品，前处理用的净化柱和免疫亲和柱、试剂盒等，而且提供快速准确的分析检测业务。 分析检测的霉菌毒素种类： ■黄曲霉毒素类：黄曲霉毒素B1，黄曲霉毒素B2，黄曲霉毒素G1，黄曲霉毒素G2，黄曲霉毒素M1，黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2总量 ■ A/B型单端孢霉烯族化合物: T-2毒素，HT-2毒素，蛇形毒素(Diacetoxyscirpenol) ，二醋酸麃草镰刀菌烯醇(Neosolaniol)，呕吐毒素(DON)，3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3 Acetyl DON)，5-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15 Acetyl DON)，雪腐镰刀菌烯醇(Nivalenol)，镰刀菌烯酮-X(Fusarenon-X) ■ 伏马毒素类：伏马毒素B1(fumonisin B1)，伏马毒素B2(fumonisin B2) ■ 玉米赤霉烯酮(zearalenone)，赭曲霉毒素A(ochratoxin A)提供真菌毒素的检测培训： 培训内容包括：高效液相色谱法、酶联免疫法、薄层层析TLC法。 培训费用：仅收取耗材费用(学员可以自带2个样品)。 公司网址： www.rapid-bio.com 公司邮箱： rapidtest@163.com 联 系 人：刘红兵 联系电话：010-633380700 13311089404 ■ 桔青霉素(Citrinin)，展青霉素(patulin) 采用技术手段： 高效液相色谱法、薄层层析TLC法、酶联免疫法
2012-3-16 10:35:00
匿名 (111.194.246.31)
北京泰乐祺科技有限公司，专注霉菌毒素检测与技术产品与服务，拥有多名专业人员和完备的检测实验室，尤其是在霉菌毒素检测方面。已与多家饲料、食品、保健品企业签订合约，提供检验服务。并且承担着国内多家第三方检测机构真菌毒素检测外包业务。如果您在养殖及生产中对霉菌毒素的污染、危害有任何疑问，可以随时来电咨询我们，也可以委托我们对饲料及饲料原料进行霉菌毒素污染程度进行鉴定。联系电话：010-633380700 13311089404 公司网址： www.rapid-bio.com 公司邮箱： rapidtest@163.com
2012-3-13 12:10:00
北京泰乐祺科技有限公司，专注霉菌毒素检测与技术产品与服务，拥有多名专业人员和完备的检测实验室，尤其是在霉菌毒素检测方面。已与多家饲料、食品、保健品企业签订合约，提供检验服务。并且承担着国内多家第三方检测机构真菌毒素检测外包业务。如果您在养殖及生产中对霉菌毒素的污染、危害有任何疑问，可以随时来电咨询我们，也可以委托我们对饲料及饲料原料进行霉菌毒素污染程度进行鉴定。联系电话：010-633380700 13311089404 公司网址： www.rapid-bio.com 公司邮箱： rapidtest@163.com
2012-3-13 12:10:00
