大鼠三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA试剂盒使用说明书
大鼠三碘甲状腺原氨酸试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
4 ng/ml -120 ng/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中三碘甲状腺原氨酸(T3)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠三碘甲状腺原氨酸(T3)水平。用纯化的大鼠三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入三碘甲状腺原氨酸(T3)，再与HRP标记的三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的三碘甲状腺原氨酸(T3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠三碘甲状腺原氨酸(T3)浓度。
大鼠三碘甲状腺原氨酸试剂盒组成
|
1 |
30倍浓缩洗涤液 |
20ml×1瓶 |
7 |
终止液 |
6ml×1瓶 |
|
2 |
酶标试剂 |
6ml×1瓶 |
8 |
标准品（240 ng/ml） |
0.5ml×1瓶 |
|
3 |
酶标包被板 |
12孔×8条 |
9 |
标准品稀释液 |
1.5ml×1瓶 |
|
4 |
样品稀释液 |
6ml×1瓶 |
10 |
说明书 |
1份 |
|
5 |
显色剂A液 |
6ml×1瓶 |
11 |
封板膜 |
2张 |
|
6 |
显色剂B液 |
6ml×1/瓶 |
12 |
密封袋 |
1个 |
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
|
120 ng/ml |
5号标准品 |
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
|
60 ng/ml |
4号标准品 |
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
|
30 ng/ml |
3号标准品 |
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
|
15 ng/ml |
2号标准品 |
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
|
7.5 ng/ml |
1号标准品 |
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
