鼠肝细胞器的超速分离方法举例

Ⅰ.前处理：
鼠肝匀浆，台式离心机1,000xg，10分，取上清，沉淀稀释后再1,000xg，10分，取上清，再重复一次取上清，三次上清液合并用于超速离心。

Ⅱ. 密度梯度离心：
日立超速离心机（各种型号）
转头：P45AT（6×94ml，实际容量85ml）
不连续蔗糖梯度：10％，20％，30％，40％，50％（w/w），各15ml，样品约10ml铺在表面
转速：40,000rpm，186,000xg
时间：2.5hr
温度：4℃
加速/减速：6/6

Ⅲ. 结果：
用日立DGF－U或手工取出梯度液，自上而下收集成30管，每管分别测定密度及测定260nm ABS值并绘成如下曲线：

可以看出：水溶性蛋白沉降在近离心管表面的及低蔗糖密度区；核糖和蛋白体沉降在16％－18％蔗糖密度区；光滑质膜沉降在27％－28％蔗糖密度区；质膜沉降在37％－38％蔗糖密度区；线粒体沉降在42％－43％蔗糖密度区，而粗质膜沉降在45％－46％蔗糖密度区。