人血清中白蛋白与球蛋白的分离

 

随着超速离心机转速的提高，用超速角式转头分离人血清中白蛋白与球蛋白的离心时间越来越短，用5—20％线性蔗糖梯度作蛋白质速率—区带（Rate—zonal）分离，样品以近等速沉降，低于分析实验结果。下面的简单分离实例有代表性。

 

设备：

离心机：智能型超速离心机（Hitachi CP—M系列，Beckman L—XP系列）

转头：定角：P90AT，P80AT，比较实验转头：P40ST

P90AT:  90,000rpm,  700,000xg,  8×12ml   K=25

P80AT:  80,000rpm,  615,000xg,  8×12ml   K=27

P40ST:  40,000rpm,  284,000xg,  6×13ml   K=139

离心管：12ml及13ml PA管

 

样品：标准人血清1 ml （2.5mg/ml），用0.15M NaCl溶解。

 

梯度液：5—20％ 线性蔗糖梯度， P90AT及P80AT梯度液量约9.5ml ，P40ST梯度液量约9.6ml。

 

方法：5—20％蔗糖梯度液上铺约1ml 人血清，对 P90AT及P80AT必须装满（用血清调节），P40ST加样至距管口3mm。

 

离心参数：

P90AT：90,000rpm，2小时，2.5小时，3小时，5℃，加速“5”减速“5”

P80AT：80,000rpm，2小时，2.5小时，3小时，5℃，加速“5”减速“5”

P40ST：40,000rpm，14小时，16小时，18小时，5℃，加速“8”减速“8”

曲线绘制：用日立DGF—U 梯度仪通过上口连续取样至带流动池分光光度计连续测O.D.（280nm）后收集。

 

结果及分析：

 

 

 

 

分析：根据以上结果，可以看出：

1．在5—20％蔗糖线性梯度中白蛋白与球蛋白基本上以等速沉降

2．用P40ST或P80AT转头分离人血清白、球蛋白在最高转速离心2.5小时效果最佳，用P40ST转头离心18小时效果最好。

3．用P40ST转头分离的结果O.D. 对离心管从管口算起容量曲线的峰形比P90AT的峰形尖锐一些，但考虑到离心机和转头的寿命，用P80AT 转头离心性价比最佳。

 

作者：余兴明   电话：13764301893,yuxingming@techcomp.cn