SNP筛查和鉴定--DHPLC法

DHPLC法 

特点：
Ø    拥有高端变性高压液相色谱仪(WAVE 3500HT)等仪器设备，配备有国内领先和国际一流水平的研究队伍。
Ø    采用DNA样品池法(将若干份PCR样品混合在一起)，使得纯合突变也能以杂合子形式得以捡出，极大提高了寻找未知SNPs的效率。
Ø    具有高通量检测、自动化程度高、灵敏度和特异性较高、检测DNA片段和长度变动范围广、相对价廉等优点
Ø    检测所需的样品量很少，PCR产物高于80ng就能满足实验要求，且无需纯化，实验重复性好
Ø    上机时间短，只需5~6min就可得出数据
Ø    根据峰图可判断是否有突变，但不能确定SNP的位置和类型，需用标准样品或结合测序验证

原理：
DHPLC基因突变筛查，就是利用离子对反向液相色谱技术，通过独特的DNA分离基质，对特定的PCR反应产物进行分离。含有突变位点的PCR扩增产物经变性、逐步降温退火后，将形成同源和异源双链（一条为突变链，另一条为正常链）两种DNA分子.在部分变性条件下，发生错配的异源双链DNA更易于解链为单链DNA，与DNAsep柱结合力降低，比同源双链DNA分子更易于被乙腈洗脱下来，从而与同源双链DNA分离.一般来说，含变异成分的PCR产物将在DHPLC图谱上比PCR非变异产物多1-2个峰型，因而两者可以被鉴别.

实验流程：
Ø    DNA提取，设计引物并合成
Ø    PCR
Ø    上机检测，数据采集以及分析
客户提供：
Ø    准确的基因名称和序列以及SNP位点信息
Ø    A、组织或血液样品B、基因组DNA 样品，需-20度保存和运输
Ø    纯度要求：OD260/280在1.6~1.8之间；OD260/230在1.8~2.2之间
Ø    浓度要求( C) ：基因组DNA浓度大于100ng/µl     
Ø    DNA用量需求（ UL）：PCR反应个数（N）* （M）/ （C）
Ø    单个PCR反应量(M)：50ng
Ø    PCR产物大小在150~800bp之间，最好在300bp左右，里面不含矿物油、甲酰胺、高压灭菌水、蛋白酶 K、牛血清白蛋白
Ø    为了提高 PCR 扩增的保真性，最好选用 Pfu DNA 聚合酶

提供结果：
Ø    提供每个PCR产物的琼脂糖凝胶电泳图片
Ø    提供电子版结果及实验流程
Ø    提供数据分析服务
Ø    实验数据及实验剩余的样品和引物为客户所有

收费构成（具体价格请咨询）
Ø    DNA提取费用
Ø    引物设计及合成费用
Ø    PCR扩增费用
Ø    上机费用
Ø    数据分析费用

北京诺赛基因组研究中心有限公司（诺赛基因）是基于基因组学研究的生物高科技企业，公司的发展目标是实现最新生物医药研究成果的产业化。诺赛基因致力于自有知识产权的创新药物的开发，生物标志的鉴定与疾病诊断/预警检测技术的研发，生物制品与试剂的生产，中国人群遗传资源和临床资源的收集、保护、利用与开发，以及生物科技领域相关技术的培训、咨询和服务。

1998年9月，北京诺赛基因组研究中心有限公司由北京生物技术和新医药产业促进中心和北京博大科技投资开发有限公司投资，中国医学科学院/中国协和医科大学、北京大学、中国科学院、军事医学科学院等单位参与组建成立。

诺赛基因开展与人类疾病相关的基因组学、功能基因组学和蛋白质组学研究。1998年10月，国家科技部批准在诺赛基因的基础上成立国家人类基因组北方研究中心，作为国家级研究基地。

诺赛基因自成立以来，整合以北京为中心的科研院所以及临床医院在基因组学及相关领域的科研力量，建立了具有世界级水平的生物学研究实验室，组建了包括8位院士在内的、由26位生物和医药领域资深科学家组成的智囊团，组织并培养了一支由近百名科技人员组成的具有丰富研发经验的科研团队。

诺赛基因现已成功完成和正在进行863、973等国家重点课题及合作项目74项，参与并完成了1%国际人类基因组测序项目，承担了致病微生物基因组测序、中国人群单核苷酸多态性（SNP）检测及疾病基因组学研究等多项国家科研项目。截止目前，诺赛基因已申请专利28族。