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酵母双杂交

酵母双杂交


酵母双杂交
酵母双杂交具体实验服务及收费标准,请拨打全国免费电话800-706-0306咨询
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最后更新:2009-9-15半年访问:69
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酵母双杂交
    酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。反式转录激活因子,例如酵母转录因子GAL4在结构上是组件式的(modular),往往由两个或两个以上结构上可以分开,功能上相互独立的结构域(domain)构成,其中有DNA结合功能域(DNA binding domain, DNA-BD)和转录激活结构域(activation domain,DNA-AD)。这两个结合域将它们分开时仍分别具有功能,但不能激活转录,只有当被分开的两者通过适当的途径在空间上较为接近时,才能重新呈现完整的GAL4转录因子活性,并可激活上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)的下游启动子,使启动子下游基因得到转录。

    在酵母双杂交系统中,“诱饵”蛋白X克隆至DNA-BD载体中,表达DNA-BD/X融合蛋白;待测试蛋白Y克隆至AD载体中,表达AD/Y融合蛋白。一旦X与Y蛋白间有相互作用,则DNA-BD和AD也随之被牵拉靠近,恢复行使功能,激活报告重组体中LacZ和HIS3基因的表达。

    酵母双杂交技术的应用:
    ● 利用酵母双杂交发现新的蛋白质和蛋白质的新功能 
    ● 利用酵母双杂交在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用
    ● 利用酵母双杂交筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间相互作用的影响

◆ SUNBIO服务及收费标准
    1) 酵母双杂交建库
    为客户构建指定的酵母双杂交基因文库。由客户提供cDNA 或组织、细胞。
    技术服务内容包括:总RNA提取、纯化,mRNA分离,cDNA制备,cDNA,连接AD载体, 连接产物转化大肠杆菌,cDNA,文库效价测定,cDNA文库扩增等内容。
    服务完成时提供两种形式的文库:(1).该文库转化的大肠杆菌甘油冻存管;(2).从该文库扩增的DNA。
    周期:2-3个月。
    单价:30000元/每个文库。

    2) 酵母双杂交文库筛选
    为客户对指定的基因文库进行酵母双杂交筛选。由客户提供诱饵基因和基因文库。 
    周期:3个月。
    单价:12000元/诱饵基因。
    如没有筛到阳性克隆,只收取筛选工本费6000元。
    筛选完成后向客户提供详细的筛选报告和阳性克隆实物。

    3) 为客户对指定的2个或多个基因之间进行酵母双杂交实验。由客户提供基因克隆。
    周期:1个月。
    单价:4,000元/每对基因。超过5对以上价格与周期另议。
    如因基因本身的性质(如因克隆过大、或有细胞毒性,或在酵母中不能正常表达等原因)导致实验失败,只收取实验工本费2000元。实验完成后向客户提供详细的实验报告和相互作用阳性的酵母共转化菌株。

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