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蛋白提取服务
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| 蛋白提取技术服务 |
| 收集蛋白样品(Protein sample preparation) 1.常用蛋白裂解液: ● 组织裂解液(全细胞蛋白提取) 1) Tris-HCL 50mmoL/L PH 7.4 2) Nacl 150 mmoL/L 3) 脱氧胆酸钠 0.25% 4) NP-40或1%TritonX-100 5) EDTA 1 mmoL/L 6) PMSF 1 mmoL/L 7) Aprotinin 1μg/ml 8) Leupeptin 1μg/ml 9) Pepstain 1μg/ml 其中:7,8,9作用不持久,要使用前加入。 ● 细胞裂解液 NP-40裂解体系: 1)150 mmoL/L Nacl 2) 1.0%NP-40或TritonX-100 3) 50 mmoL/L Tris(PH8.0) ● RIPA裂解体系 1) 150 mmoL/L Nacl 2) 1.0%NP-40或TritonX-100 3) 0.5%脱氧胆酸钠 A 4) 0.1%SDS 5) 50 mmoL/L Tris( ph8.0) 2. 蛋白提取程序: ● 培养细胞样品处理方法: 培养动物组织细胞由于没有细胞壁,因此可以将细胞收集下来,直接加入裂解缓冲液(Lysis buffer)抽提总蛋白。 总蛋白抽提程序: (1) 培养细胞的收集; (2) 用磷酸缓冲液(PBS)洗细胞3 次(室温,1000g, 各2min); (3) 将细胞分装到1.5ml Eppendof 管中,吸干残留的PBS; (4) 加入裂解缓冲液(1.5x106 个细胞大约加入100μL 裂解液),4℃超声20min,使其充分溶解 (5) 4℃,12,000g,离心20min; (6) 吸取上清并用Brandford 法定量蛋白,然后分装至Eppendorf 管里,保存在-75℃ 备用。 ● 动物组织超速离心法: (1)取材; (2)用研钵在液氮冷冻条件下将样品(动物组织)研成粉末,每1g 样品加入0.5ml 裂解液, 室温反应30min; (3)4℃,15 000×g离心25 min; (4)取离心上清。Brandford 法定量,分装后置-75℃保存。 |