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双荧光素酶报告基因检测服务
维真生物提供双荧光素酶检测服务,包含启动子与转录因子互作检测、miRNA-靶基因调控验证。
服务类别:分子与细胞总访问:425
最后更新:2025-7-11半年访问:137
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  • 服务介绍
  • 公司简介
荧光素酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称,可以催化荧光素氧化成氧化荧光素,在氧化过程中发出生物荧光。荧光素酶以出色的灵敏度、使用方便、可定量检测成为理想的报告基因。荧光素酶的种类很多,其中应用较为广泛的是萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,FLUC)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase,RLUC)。

由于萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的催化底物和发光颜色不同,且光吸收波长不同,可在互不干扰的情况下进行检测,此外,在哺乳动物体内两种酶均无内源性表达,因此作为双荧光素酶报告基因系统得到广泛使用。在双荧光素酶检测中,通常以萤火虫荧光素酶为实验报告基因,以海肾荧光素酶为对照报告基因,以减少细胞活性、转染效率等外在变化因素对实验准确性的影响。
双荧光素酶报告基因系统凭借灵敏度高、检测范围广、方便快速的优势,已成为基因转录调控、启动子结构分析、启动子SNP分析和非编码RNA靶向互作等研究的重要手段。


服务内容一:启动子与转录因子互作检测

将靶启动子片段插入到萤火虫荧光素酶表达序列上游,构建实验报告基因质粒,将要检测的转录因子表达质粒与两种报告基因质粒共转染相关细胞;经细胞培养后裂解细胞,离心取上清,随后分别加入两种荧光素酶底物,荧光素酶与底物反应产生荧光,通过检测荧光的强度测定荧光素酶的活性,从而判断转录因子是否与该启动子存在相互作用。

备注:如果转录因子能够激活靶启动子,则萤火虫荧光素酶基因就会表达,且萤火虫荧光素酶的表达水平与转录因子的作用强度成正比。


服务内容二:miRNA-靶基因调控验证

miRNA通过识别mRNA的3’UTR区,诱导细胞内沉默复合体介导的mRNA降解或抑制mRNA的翻译过程。将野生型或突变型待测靶基因的3’UTR序列构建至萤火虫荧光素酶基因的3’端,将两个报告基因质粒与miRNA在细胞内共表达,通过比较萤火虫荧光素酶报告基因表达活性的改变,验证miRNA对靶基因的调控作用。

备注:若萤光素酶的活性降低,提示miRNA可能参与抑制靶基因的表达。

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