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维真生物提供双荧光素酶检测服务,包含启动子与转录因子互作检测、miRNA-靶基因调控验证。
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将靶启动子片段插入到萤火虫荧光素酶表达序列上游,构建实验报告基因质粒,将要检测的转录因子表达质粒与两种报告基因质粒共转染相关细胞;经细胞培养后裂解细胞,离心取上清,随后分别加入两种荧光素酶底物,荧光素酶与底物反应产生荧光,通过检测荧光的强度测定荧光素酶的活性,从而判断转录因子是否与该启动子存在相互作用。
备注:如果转录因子能够激活靶启动子,则萤火虫荧光素酶基因就会表达,且萤火虫荧光素酶的表达水平与转录因子的作用强度成正比。
miRNA通过识别mRNA的3’UTR区,诱导细胞内沉默复合体介导的mRNA降解或抑制mRNA的翻译过程。将野生型或突变型待测靶基因的3’UTR序列构建至萤火虫荧光素酶基因的3’端,将两个报告基因质粒与miRNA在细胞内共表达,通过比较萤火虫荧光素酶报告基因表达活性的改变,验证miRNA对靶基因的调控作用。
备注:若萤光素酶的活性降低,提示miRNA可能参与抑制靶基因的表达。