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适用产品 CTLC-ABC细胞冻存液 操作流程如下
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PBMC 的冷冻保存
冷冻时必须考虑每种细胞类型的细胞渗透性、试剂毒性和冷却速率。 DMSO 引起的渗透压（超过 DMSO 的固有毒性）是成功冷冻和解冻 PBMC 需要控制的主要因素之一。维持细胞的代谢活性很重要，这样它们就可以补偿渗透压和膜脂流动性。所有试剂均应在室温下使用（最好在 37° C）。
冷冻时必须考虑每种细胞类型的细胞渗透性、试剂毒性和冷却速率。 DMSO 引起的渗透压（超过 DMSO 的固有毒性）是成功冷冻和解冻 PBMC 需要控制的主要因素之一。维持细胞的代谢活性很重要，这样它们就可以补偿渗透压和膜脂流动性。所有试剂均应在室温下使用（最好在 37° C）。
准备：
1. 通过将 CTL-Cryo™B 缓慢添加到 CTL-Cryo(™A.（CTL-Cryo™B 含有 DMSO 作为成分，请参阅随附的 SDS。）通过 0.22μm 过滤器过滤 CTL-Cryo™A-B。
2. 如果将 CTL-Cryo™B 添加到 CTL Cryo™A 并且过滤后在 35-37° C 下没有生成 CTL-Cryo
2. 如果将 CTL-Cryo™B 添加到 CTL Cryo™A 并且过滤后在 35-37° C 下没有生成 CTL-Cryo
™A-B 混合物，则将 CTLCryo™A-B 混合物和 CTL -在 37° C CO2培养箱中冷冻™C。 （建议在 Ficoll®梯度运行时开始此步骤）。
3. 每个冷冻管应包含大约 10-15x106。每管冷冻更多细胞可能会导致细胞损失。根据预期的细胞计数（预计每毫升抽取的血液有 1-2x106PBMC）标记每个样品的适当数量的冷冻管。
洗涤后：
1. Ficoll®纯化和洗涤后，将 PBMC 重悬于温热的 CTL-Cryo™C 中，将细胞浓度调整至 20x10
1. Ficoll®纯化和洗涤后，将 PBMC 重悬于温热的 CTL-Cryo™C 中，将细胞浓度调整至 20x10
6/ml（或预期最终浓度的两倍）。
2. 不使用移液器，轻敲管子轻轻混合细胞，避免形成泡沫！
3. 在大约两分钟的时间内，慢慢地将等体积的温 CTL-Cryo™A-B 混合物添加到含有 PBMC 的 CTL-Cryo™C 中。 （逐滴添加 CTL-Cryo™A-B 混合，同时轻轻旋转试管，以确保两种溶液完全混合。）
4. 将含有 PBMC 的 CTL-Cryo™A-B-C 悬浮液等分到预先标记的冷冻管中。轻轻缓慢地移液以尽量减少剪切力；不要尝试用移液器进行额外的混合。
5. 将冷冻管放入装有丙醇的室温 Nalgene®冷冻容器 (Mr. Frosty) 中，并转移到 -80° C 冰箱中至少 12 小时。在此期间请勿打开冰箱。使用专用的-80° C冷冻柜，以防止样品因打开冷冻柜而摇晃或冷冻柜温度波动。
6. 当细胞立即转移到冷冻容器中的冷冻管并转移到 -80° C 冰箱中时，可以看到最佳的功能和活力。
7. 至少 12 小时且不超过 48 小时后，将冷冻管转移至蒸气/液氮罐中进行储存
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