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扫描电镜(SEM)

扫描电镜(SEM)


Scanning electron microscopy (SEM)
扫描电镜由电子枪发射出来的电子束,在加速电压的作用下,经过磁透镜系统汇聚,形成直径为5nm,经过二至三个电磁透镜所组成的电子光学系统,电子束会聚成一个细的电子束聚焦在样品表面。
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最后更新:2022-11-16半年访问:139
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实验收费标准:

 

项目编号 项目名称 计价单位 单价
ZC1139  扫描电镜(SEM) 个 650




实验结果展示:

saomiao.jpg

实验流程:

一、 扫描电镜(SEM)  制样步骤

1、取材固定:新鲜组织确定取材部位,尽量减小牵拉、挫伤与挤压等机械损伤,1-3min内取样,组织块面积不超过3mm2,用PBS轻轻漂洗将样本表面的血污,毛发等去掉,保护好需要扫描的面并做好标记(如在对面进行剪角处理)。迅速投入电镜固定液室温固定2h,再转移至4°保存。

贴壁细胞:贴壁于盖玻片的细胞培养处理完成后弃培养基,用PBS轻轻漂洗后,弃PBS加电镜固定液室温固定2h,再转移至4°保存。注意保护好扫描面避免剧烈震荡细胞脱落。

2、后固定:固定好的样品经0.1M磷酸缓冲液PB(PH7.4)漂洗3次,每次15min。0.1M磷酸缓冲液PB(PH7.4)配制1%锇酸室温避光固定1-2h。0.1M磷酸缓冲液PB(PH7.4)漂洗3次,每次15min。

3、脱水:组织依次入30%-50%-70%-80%-90%-95%-100%-100%酒精每次15min,乙酸异戊酯 15min。

4、干燥:将样本放入临界点干燥仪内进行干燥。

(干燥的样品及无机材料不需要以上步骤)

5、样本导电处理:将样本紧贴于导电碳膜双面胶上放入离子溅射仪样品台上进行喷金30s左右。

6、扫描电子显微镜下观察采图。

 
二、扫描电镜样本准备方法及要求
 
1、动植物组织样本

① 1-3min内取样,组织块不超过3mm2,用PBS轻轻漂洗将样本表面的血污,毛发等去掉,将需要扫描的面做好标记(如在对面进行剪角处理)。

② 取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤,刀片要锋利避免挫伤组织。尤其是注意保护扫描面。

③ 组织取下后立即投入电镜固定液内室温固定2h,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

④ 植物样本放入固定液后需抽气沉底。

2、细胞样本

贴壁细胞:贴壁于盖玻片的细胞培养处理完成后弃培养基,用PBS轻轻漂洗后,弃PBS加电镜固定液室温固定2h,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

悬浮细胞:离心收集细胞要肉眼可见细胞沉淀芝麻至绿豆大小,弃培养基后用PBS轻轻漂洗后,弃PBS加电镜固定液并将细胞吹打开悬浮于固定液内室温固定2h,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

3、细菌样本

长于固体培养基的细菌:连带着培养基切下不超过3mm2组织块,有细菌的一面作为扫描面,放于电镜固定液内室温固定2h,再转移至4℃保存, 4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

悬浮细菌孢子等:离心收集细菌要肉眼可见细菌沉淀芝麻至绿豆大小,弃培养基后用PBS轻轻漂洗后,弃PBS加电镜固定液并将细菌吹打开悬浮于固定液内室温固定2h,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

4、其他如粉末状材料

直接准备干燥的粉剂。带有磁性的金属材料(铁,钴,镍等)不能做扫描电镜。

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