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CO-IP/WB/ChIP/免疫组化（荧光）
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一、免疫共沉淀( Co-mmunoprecipitation, Co-IP )
1.1Co-IP :是一种利用抗原抗体相互作用的免疫学原理来研究蛋白质相互作用的经典实验方法,它可以确定两种蛋白在完整细胞内生理条件下是否存在相互作用。
1.2免疫共沉淀(CoIP )实验步骤
1.试剂准备,样品收集
2.免疫沉淀反应后,在进行电泳
3.通过免疫共沉淀确定结合蛋白
二、免疫印迹immunoblotting
2.1免疫印迹immunoblotting:蛋白质印迹western blot，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。Western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。Western blot常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
2.2蛋白质印迹western blot实验步骤
1.蛋白提取和定量（如果提供蛋白样品，则直接电泳预实验检测抗体特异性）；
2.SDS-PAGE 10-15% 变性聚丙*酰胺凝胶电泳；
3.转膜（PVDF膜）；
4.封闭 （5%脱脂奶粉）；
5.一抗孵育（其中内参基因为Tubulin或HistoneH3.1）；
6.二抗孵育（如果由于材料降解或一抗造成实验无法继续，则收相关预实验费用）；
7.显色（ECL）；
8.曝光、洗片、灰度分析；
三、ChIP(Chromatin immunoprecipitation)染色质免疫共沉淀
3.1染色质免疫共沉淀：技术主要应用于验证及探寻体内环境中，蛋白质和DNA的直接相互作用，旨在探索特定蛋白质在DNA上的特定结合序列，常在研究转录调控以及组蛋白修饰中被应用到。
3.2ChIP实验步骤
1.样品准备
2.细胞固定
3.超声打碎
4.免疫沉淀
5.洗涤
6.DNA纯化
四、免疫组化(荧光）
4.1兔疫荧光:又称为荧光抗体技术,将荧光标记技术和免疫学方法结合起来,利用抗原抗体相互作用从而对组织或细胞内的抗原或抗体 物质进行定位、示踪定性以及相对定量等。
4.2石蜡切片兔疫荧光实验步骤
1.烘箱内进行烘片,然后将切片进行常规脱蜡至水;
2.抗原修复:使用水浴锅或电炉煮沸热修复,或者中档微波修复,缓冲液为0 01M柠檬酸钠缓)冲液(pH6.0) ;
1.1Co-IP :是一种利用抗原抗体相互作用的免疫学原理来研究蛋白质相互作用的经典实验方法,它可以确定两种蛋白在完整细胞内生理条件下是否存在相互作用。
1.2免疫共沉淀(CoIP )实验步骤
1.试剂准备,样品收集
2.免疫沉淀反应后,在进行电泳
3.通过免疫共沉淀确定结合蛋白
二、免疫印迹immunoblotting
2.1免疫印迹immunoblotting:蛋白质印迹western blot，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。Western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。Western blot常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
2.2蛋白质印迹western blot实验步骤
1.蛋白提取和定量（如果提供蛋白样品，则直接电泳预实验检测抗体特异性）；
2.SDS-PAGE 10-15% 变性聚丙*酰胺凝胶电泳；
3.转膜（PVDF膜）；
4.封闭 （5%脱脂奶粉）；
5.一抗孵育（其中内参基因为Tubulin或HistoneH3.1）；
6.二抗孵育（如果由于材料降解或一抗造成实验无法继续，则收相关预实验费用）；
7.显色（ECL）；
8.曝光、洗片、灰度分析；
三、ChIP(Chromatin immunoprecipitation)染色质免疫共沉淀
3.1染色质免疫共沉淀：技术主要应用于验证及探寻体内环境中，蛋白质和DNA的直接相互作用，旨在探索特定蛋白质在DNA上的特定结合序列，常在研究转录调控以及组蛋白修饰中被应用到。
3.2ChIP实验步骤
1.样品准备
2.细胞固定
3.超声打碎
4.免疫沉淀
5.洗涤
6.DNA纯化
四、免疫组化(荧光）
4.1兔疫荧光:又称为荧光抗体技术,将荧光标记技术和免疫学方法结合起来,利用抗原抗体相互作用从而对组织或细胞内的抗原或抗体 物质进行定位、示踪定性以及相对定量等。
4.2石蜡切片兔疫荧光实验步骤
1.烘箱内进行烘片,然后将切片进行常规脱蜡至水;
2.抗原修复:使用水浴锅或电炉煮沸热修复,或者中档微波修复,缓冲液为0 01M柠檬酸钠缓)冲液(pH6.0) ;
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