冻存保种

 随着转基因、基因敲除、基因敲入、人源化和其他基因修饰动物的大量制作和使用，保存这些重要的动物模型需要大量的人力、财力和空间投入。　　冷冻保存技术的出现，为科学研究者提供了不必花费昂贵代价维持动物模型核心种群的方法。冷冻保存技术还有其他许多优点，如可以避免珍贵的动物模型受到微生物污染；避免受到火灾、洪水和地震等自然灾害毁灭性的打击；更重要的是对于某些品系，可以防止伴随动物代数增加出现的基因停止或改变表达的风险。与活动物的国际运输相比，运输冻存的精子、胚胎或卵巢的成本和风险更低。
　　目前，配子冻存以精子和胚胎为主，部分冻存卵巢或卵子，因为卵子解冻后复苏效率还比较低。维通达通过冻存精子，胚胎或卵巢组织，可以确保客户种质资源的安全。一旦客户需要使用冻存的种质资源，最快可以4~6周获得冷冻保存的动物资源。
服务内容和流程：
（1）精子冻存
　　精子冻存在保种服务中广泛应用，其优势在于技术成熟，成本低，容易操作等特点。通过无菌手术分离可育雄鼠的附睾，在特定的溶液进行精子的游离，采集边缘活力最好的精子，并加入专用的冷冻保护液，通过麦管冷冻保存在液氮中。
建议每个品系提供至少3只12周至4月龄的可育成年小鼠或大鼠，冻存20支麦管的精液。
（2）胚胎冻存
　　胚胎冻存是最早的和最安全的保存实验动物品系的方法。影响胚胎冷冻保存成功的三个重要方面包括：
　　①胚胎的数量；
　　②复苏后存活胚胎的数量；
③胚胎移植后存活的成年动物数量。
　　 建议每个品系冻存约300枚2cell胚胎，每管20~30枚胚胎，放入液氮中保存。胚胎的来源，既可以通过超数排卵的方法，或者通过体外受精（IVF）的方法获得。当然，也可以与品系净化结合起来，这样可以节约胚胎准备的成本。
该技术的流程包括：
　　①胚胎采集。建议冻存2-cell胚胎。
　　②胚胎清洗。我们采用国际胚胎移植协会的建议方案进行清洗，目的是防止胚胎被微生物污染。
　　③胚胎冻存。采用玻璃化冷冻进行，经冻存液按照标准的程序处理后，投入液氮保存。
　　④复苏验证。冻存一周后，取出1支验证管的胚胎进行复苏，囊胚发育率大于50%，或胚胎移植后有小鼠出生，表明胚胎冷冻保存成功。
　　⑤长期保存。验证保存成功的品系，放入专用的胚胎保存液氮罐中长期保存。
 

北京维通达生物技术有限公司是在国家863计划倡导下，为推动我国疾病模型动物的研发和产业化，于2000年成立的一家专业从事遗传修饰动物模型研究与开发并提供相关产品和技术服务的高科技公司。
维通达有一支海归博士和国内知名大学博士领军的技术人才队伍，在模型动物研发领域拥有十多年的深厚的技术积淀和研发及实验操作经验，成功建立了成熟的高效大规模制备疾病动物模型的技术平台，将转基因，基因敲除/敲入技术建成了系统化、流程化的操作模式；具备从基因克隆、载体构建到显微注射、品系建立、基因型鉴定、表型分析检测、冷冻保存等一系列相关的技术服务能力。与此同时，公司还掌握了慢病毒转基因，噬菌体介导的同源重组，基因诱捕，条件性基因敲除，四倍体胚胎聚合，小鼠克隆及iPS细胞诱导分化等领域内相关的前沿技术，大大提高了疾病模型研发服务的能力和水平。维通达利用该平台技术已经为国内外客户成功制作几十种遗传修饰小鼠和数百种嵌合体小鼠。
维通达利用该平台服务客户的同时，还致力于开发与人类重大疾病研究相关的理想的小动物模型，已经成功研制出了人源化造血/免疫系统小鼠模型和人源化肝脏小鼠模型，其中人源化肝脏小鼠模型中肝脏人源化程度可达80%以上。目前我们可以提供两种人源化小鼠的制作服务，期望帮助客户解决艾滋病病毒（HIV），乙型肝炎病毒（HBV），丙型肝炎病毒（HCV）和疟疾（Malaria）等人类疾病研究缺乏动物感染模型的难题，为相关新药研发提供可靠的体内研究平台。
硬件设施方面，维通达公司拥有分子生物学、细胞生物学、细胞培养、显微注射等专业实验室和SPF级动物房，可以提供从基因打靶，胚胎操作，品系建立等一系列遗传修饰小鼠制作相关的技术服务，同时也提供自有的人源化模型和各类原代/iPS细胞产品等。维通达的目标是成长为国内外客户提供动物模型相关完整解决方案的专业化领军企业，我们期望以专业化，个性化，精准的服务为推动生命科学研究，促进人类健康贡献一份力量！