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对于检测较少几种miRNA的表达差异通常采用Real-Time PCR的来对miRNA进行检测，其具有快速、特异性强、灵敏度高等优点。
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简介
MicroRNAs（miRNAs）是一种小的内源性非编码RNA分子，大约由21－25个核苷酸组成。这些小的miRNA通常靶向一个或者多个mRNA，通过翻译水平的抑制或直接降解靶标mRNAs而调节基因的表达。
miRNAs起源于内源性表达转录本，广泛存在于线虫、果蝇、植物、哺乳动物等众多生物体中。
miRNA途径开始于一个miRNA基因的pri-miRNA（PrimarymiRNA）转录本；这个70－100nt的发卡RNAs（pri-miRNA）在核内被核糖核酸酶Drosha加工处理而最终成为pre-miRNA（Precursor miRNA）；之后pre-miRNA被核输出蛋白exportin 5转运入胞质，接着被第二个核糖核酸酶Dicer消化为21－25nt的miRNA；这个阶段的miRNA可以结合RISC（RNA-Induced Silencing Complex）并与靶标mRNA互补并列；miRNA和靶序列的互补程度决定了靶基因mRNA在翻译水平被部分抑制或被直接降解。
植物体中，促进靶mRNA降解是主要的工作方式，而哺乳动物中则以翻译水平的抑制为主要方式。
microRNA的表达检测
由于miRNAs在众多程序的调控，诸如发育、细胞增殖和凋亡以及肿瘤发生相关等领域发挥作用，因此miRNAs的鉴定和定量研究成为迅速发展的研究领域。miRNA的发现可以通过克隆特定组织、细胞或者某个生物体特定发育阶段的miRNA并测序完成。microRNA芯片或qPCR的检测方法比较简单，可以快速的对定量已知的miRNA表达差异。
1、microRNA 芯片服务
Agilent Technologies Inc.开发出具有独特设计的miRNA检测芯片，能特异性地检测出成熟的miRNA并能很好地区分高度同源的miRNA 分子。该平台还具有特异性高、灵敏度高等特点。可以广泛地应用于检测和比较各类样品的miRNA表达状态，并通过分析其调控的靶基因来深入分析其调控机制或生物学功能。
作为miRNA芯片的后起之秀，Agilent miRNA芯片自上市之初就受到业界广泛关注，上市两年来，其优异的性能指标更是获得科研工作者的广泛认可，2009年稳占国内市场应用第一名。
Agilent microRNA芯片技术特点：
1. 唯一能通过特殊的探针设计区分成熟miRNA和miRNA前体的芯片平台；
2. 无需分离miRNA，直接用Total RNA 进行实验，只需100ng的Total RNA 即可用来进行标记实验，避免了分离、富集、放大等过程带来的影响；
3. 样品适用范围广：组织、血清、血浆、FFPE、冰冻切片组织、脱落细胞等均可进行实验；
4. 高特异性：特殊的专利探针设计能区别一个碱基的差异；
5. 高灵敏度：检测丰度跨4个log，最高可达6个log，只要存在6000个拷贝的分子就可以检出。
2、qPCR检测microRNA的表达
对于检测较少几种miRNA的表达差异通常采用Real-Time PCR的来对miRNA进行检测，其具有快速、特异性强、灵敏度高等优点。
工作原理 ：
茎凸环结构的逆转录引物能与miRNA 3'端部分结合，在逆转录酶的作用下进行逆转录反应，然后特异的正反向引物和SYBR Green荧光染料共同参与的定量PCR反应体系，实现对逆转录产物进行定量检测。
检测优点：
- 检测简便、快捷、节约：miRNA qPCR Detection System是基于SYBR Green染料法的qPCR检测系统，可用于从一个合成反应的cDNA中检测多种miRNAs。
- 检测的特异性：独特的miRNA引物设计技术及其优化的反应体系避免了转染质粒的污染
- 检测分辨率高：该系统能分辨单碱基差异的miRNA。
- 检测灵敏度高：可在低至pg级的总RNA中检测到特异表达的miRNA。
