转录组测序

 

有参考基因组的转录组分析技术路线 

推荐平台：Illumina HiSeq 2000、Illumina MiSeq

 

 

无参考基因组的转录组分析 

推荐平台：Roche 454 FLX+

 

 

 

 

1、 组织样品：要求动物、植物、微生物总量大于2 g的新鲜样品（植物材料应尽量选取幼嫩部位）。采样后将样品立即用RNAlater和液氮速冻，保存于-80℃（保存期不超过一个月），送样时使用干冰运输（不超过72 h）；提取RNA后经变性电泳，保证各RNA条带清晰、比例适中、完整性好、无降解。

 

2、 细胞样品：先使用TRIzol试剂进行处理，每0.25 mL样品（5-10×106个细胞）加入0.75 mL TRIzol试剂（可参考TRIzol试剂说明书），于-80℃保存，并提供2-3份该样品。原则上不接收未经TRIzol处理的细胞样品。

 

3、 总RNA：浓度≥250 ng/μl，总量≥50 μg；OD 260/280介于1.8-2.2之间，OD 260/230值应≥2.0。电泳检测28S:18S至少大于1.5；RIN值≥8.0；并确保RNA无降解，无污染；或提供浓度≥50 ng/μl，总量≥1 μg的mRNA。同时，提供质量检测相关数据和图片，包括分光光度计、电泳胶图或Nanodrop仪器检测数据。

 

4、 样品保存期间切忌反复冻融。

 

5、 送样管务必标清样品编号，管口使用Parafilm膜密封。