Western Blotting实验技术服务

Western Blotting实验技术对外服务（传统方法）

 

简介：免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的

免疫生化技术。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成

为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。

主要实验步骤如下： 

1. 蛋白质抽提       2. 蛋白质定量             3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)  

4. 蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜          5. 膜的封闭和抗体孵育          6. 结果检测

7. 数据分析                                                            8. 提供实验报告

仪器与试剂：

1．仪器

高速组织捣碎机：SWISS KINEMATIC Ltd. Co（型号：PT1600E）

电泳仪：北京六一仪器厂（型号：DYY-8C）

电泳槽：北京六一仪器厂（型号：DYCZ-24D）    

转印槽：北京六一仪器厂（型号：DYCZ-40D）

低温高速离心机：湖南湘仪公司（型号：H2050R）

超低温冰箱：美国FORMA公司（型号：702）

分光光度计：上海分析仪器总厂（型号：721）

脱色摇床：上海琪特分析仪器有限公司（型号：STS-2）

操作流程：

1样品准备

1）分别取大约200mg组织加入液氮碾磨成粉末状，按每200mg组织加900μl上样Buffer(无溴酚蓝)和100ul 10mg/ml PMSF，混匀，玻璃匀浆器冰点匀浆

2）4℃，12000rpm离心10min

3）取上清夜-70℃冻存24hr

5）4℃12000rpm再次离心10min，取上清分装，一份用于定蛋白，另一份加入溴酚蓝(0.1%(W/V))后于100℃加热4min，后于-20℃保存待用。

2定蛋白及计算电泳上样量

根据总蛋白测定试剂盒说明书操作测定样本中的总蛋白含量，电泳上样量定为40ug

3电泳

1）安装好电泳装置

2）根据不同的指标配制相应浓度的分离胶，灌胶约3/5体积，液封(<10%用0.1%SDS,>10%用异丙醇)

3）30min后，待凝后倾去封液

4）配5%的浓缩胶，灌胶至距平板顶部2mm处，插入梳子, 30min后，待凝后拔出梳子，用去离子水清洗加样孔，用滤纸吸干

5）上样：各样品取50ug上样，marker取10μl上样(上样前需按说明书进行预处理)

6）缓慢加入内、外槽缓冲液，接通电源，90v电泳至指示剂进入分离胶后，调电压至150V继续电泳

7）当指示剂距平板底端1cm处时停止电泳

4 转膜及检测

1）准备2个Φ12cm的平面皿，一个装去离子水浸泡NC膜20min，另一装转移缓冲液浸泡海绵和滤纸20min

2）取下胶，切除浓缩胶部分后，将分离胶浸入转移缓冲液中约5min

3）按顺序安装好转膜装置（黑色板-海绵-三层滤纸-凝胶-硝酸纤维膜-三层滤纸-海绵-红色板）

4）完全排除气泡，4℃，100mA转膜2hr。

5）倾去转膜缓冲液，拆除转膜装置，将硝酸纤维膜放入丽春红中摇床染色15min，用去离子水清洗至能看到条带，后用铅笔标出marker位置，再用去离子水震荡以去除浮色。在右上角剪去一角以辨上下左右

6）将膜转移至另一容器中，用5%脱脂奶粉封闭, 4℃过夜

7）将膜转移至尽可能小的容器中并加入稀释好的一抗

8）37℃摇床孵育约2hr

9）PBST洗涤4次，每次5min

10）将膜转移至尽可能小的容器中并加入稀释好的二抗，37℃摇床孵育约30min

11）PBST洗涤4次，每次5min

12）将膜转移至尽可能小的容器中并加入BCIP/NBT底物，室温孵育30min

13）取出NC膜，用蒸馏水漂洗后晾干

14）扫描及分析

服务要求：

• 样本要求：组织样品，每份样本约250-500mg,新鲜或正确保存的组织。细胞样本：每份样本：1*10 6－1*10 7细胞数。
• 客户提供有效的一抗，（国产抗体一般不接纳） 一抗自备或代购。
• 客户提供欲检测目的蛋白的详细背景资料。以及提供样本的种属，类型。

结果提供：

• 目的蛋白实验图片。
• 灰度分析结果。（免费分析）
• 内参结果。（免费跑胶）
• 详细的实验步骤。
• 免费提供蛋白样本保存液。

完成时间：

接受样本后，1月以内。

注意事项：

1、客户要确保模型建造的成功性。

2、客户要确保抗体的有效性。

3、如要加快的客户可以和我们联系沟通。

4、收费标准：以每张膜8个样本收费，不足8个样本的按8个样本收费）

 

【本平台合作项目】

分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！

【全国免费热线】：400-675-6758

【电话】 023-65316016,023-65316556

【邮箱】 china-western@163.com

【官网网址】www.cqwestern.com

【地址】 重庆高新区生物医药研发产业园D栋

 

  公司简介

重庆威斯腾生物医药科技有限责任公司（简称“威斯腾生物”）是重庆高圣医药有限责任公司参与组建，放眼于全球生物医药前沿技术转化应用开发，立足于全国生物医药研发检测合作及项目孵化、成果转化，现在发展为一家集生物医药技术转化、分子诊断产品开发及创新生物药物开发的科技集团公司。威斯腾生物致力于重大疾病包括恶性肿瘤、重大传染病等领域的早期筛查及快速检测。公司总部设立于重庆高新区，同时在上海和北京设有管理团队和运行机构。 
威斯腾生物拥有专家顾问团队千人专家7人，长江学者2人，海外院士2人；现有固定研发人员100余人同时还拥有320人的海外科研顾问团队。拥有完善的基础实验平台、先进的实验设备、专业的技术团队、标准的操作流程、优质的合作平台和强大的科学家网络，可为国内外研发机构与药企提供专业的生物研发检测合作和科技成果转化项目指导。七大基础服务平台包括：细胞生物学研究平台、分子生物学研究平台、病理学研究平台、免疫学研究平台、动物模型研究平台、蛋白质与多肽研究平台、测序和芯片研究平台。此外，公司拥有四大创新研发中心：分子诊断开发平台,CRISPR/Cas9靶向基因修饰药物开发平台、纳米靶向载药创新平台、创新药物筛选平台，除了进行公司的研发项目外，还可为从事相关研究的团队和企业提供个性化服务。
威斯腾生物研发中心一直致力于高端分子诊断产品的创新研发，拥有国内外处于领先地位的核心技术包括超微量核酸快速提取技术、快速荧光原位杂交（FISH）技术，CRISPR/Cas9基因定点编辑技术，荧光量子点材料开发和运用，医学模式动物开发等。
重点研发领域包括肺癌、结直肠癌、乳腺癌等恶性肿瘤的快速早期诊断，目前已成功开发非小细胞肺癌快速FISH诊断试剂盒、乳腺癌快速FISH诊断试剂盒、超微量粪便核酸快速诊断结直肠癌试剂盒等产品，其中非小细胞肺癌快速FISH诊断试剂盒入选重庆市技术创新与应用示范专项（产业类）重点研发项目名单，获中国生物医药创新创业项目最具投资价值TOP10评选赛北京站荣获一等奖、第八届中国创新创业大赛生物医药行业组重庆赛区冠军等。
同时，公司在重大传染病的快速检测及诊断上进行了研发布局，包括结核、EV71手足口病等重大传染病的快速诊断，拥有项目包括超微量尿液核酸检测结核试剂盒、量子点荧光标记传染病快速检测试剂盒等。新冠病毒疫情爆发后，威斯腾生物第一时间组建“新型冠状病毒试剂盒紧急研究小组”及“新型冠状病毒研发物资采购小组”，自筹经费成功研发新型冠状病毒（2019-nCoV）快速核酸检测试剂盒（免核酸提取荧光PCR一步法）、新冠病毒粪便RNA核酸提取试剂盒。产品已提供给20家以上的疾控中心和公共卫生中心使用，并与以上第三方疾控中心/公共卫生中心建立起了长期稳定的试用关系。
威斯腾生物是国家高新技术企业、科技型企业、市级新型研发机构、专精特新企业、北京市海淀区生物医药与大健康协会副会长单位、重庆市医药行业协会副会长单位。下属研发平台被认定为“中关村生物医药共享平台”、“中关村海淀区生物医药公共研发检测平台”、“重庆市生物医药检测共享平台”等。公司多次在全国性比赛中获奖，2019年荣荣获第八届中国创新创业大赛生物医药行业组重庆赛区冠军。
同时，威斯腾生物积极参与国际技术转移、成果转化相关合作，与美国、澳大利亚、新加坡等相关高校、研究院所建立了深厚的联系和多元化的合作，公司坚持以“技术创新、机制创新，文化创新，管理创新，战略创新”的理念，为重大恶性肿瘤、传染病疾病等领域的创新研发而不懈努力。
 

  核心竞争力

• 荧光量子点材料开发和运用
• 快速荧光原位杂交（FISH）
• CRISPR/Cas9基因定点编辑技术
• 基因芯片诊断
• ChIP表观遗传研究
• 医学模式动物开发

 

产业布局：

• 科技服务
• ctDNA,CTC液体活检
• 病理医学诊断
• PDX肿瘤筛查
• POCT产品开发
• IVD产品开发
• 分子医学诊断
• 创新研发系统

  行业交流

  2015年12月 由中国医药企业发展促进会、中国医药科技成果转化中心主办，重庆市医药 产业发展办公室指导，威斯腾生物医药承办的“首届2015·中国（重庆）生物医药前沿技术与产业化发展研讨会”在重庆渝州宾馆隆重举行；

  2016年4月  新加坡工程院院士、美国电子工程院连勇院士到威斯腾生物医药交流访问；

  2016年6月  美中药协（SAPA）总会前会长、美国强生公司研发总监、美国药学家协会院士戴卫国博士到威斯腾生物医药交流访问；

  2016年6月  威斯腾生物医药受邀参加第二届药学进展前沿高峰论坛；

  2016年8月  威斯腾生物医药受邀参加2016北京生物医药科技成果展示暨项目推介会；

  2016年10月  威斯腾生物医药受邀参加“科技部科技成果直通车暨首届科技成果路演活动”；

  2016年10月  威斯腾生物医药受邀参加2016中国（泰州）抗体药物高峰论坛；

  2016年11月  威斯腾生物医药受邀参加中国医药企业发展促进会第三次会员代表大会；

  2016年11月  威斯腾生物医药成为诺奖医学峰会投资委员会常务委员单位；

  2016年12月  威斯腾生物医药受邀参加北京市海淀区生物与健康产业协会第一届会员大会暨2016中关村核心区生物与健康产业发展高峰论坛；

  2017年1月   威斯腾生物医药受邀参加首届国际未来论坛；

  2017年1月   威斯腾生物医药受邀参加第二届中国天使两会双创年度盛典；

  2017年3月  北京生物技术和新医药产业促进中心潘悦主任一行到威斯腾生物医药交流访 问；

  2017年4月   威斯腾生物医药受邀参加四川省人民政府主办的医药健康产业深度合作和创新发展座谈会。

  企业文化

  公开透明的竞争文化机制

  竞争文化的培养是企业文化着重培养的重要内容，良好的竞争氛围使每位员工不甘落后和停滞。采取正确的竞争策略，能够极大地调动企业员工的积极性、创造性，焕发出竞争精神和创新精神，使人的潜能得到全面、充分地发挥，从而使整个企业的竞争能力得到全面地提高。

  公开透明的竞争机制的建立，使每位员工看到并享有畅通的晋升通道，保证每位员工在威斯腾都能一展所长。

  重视素质培养和全面发展

  威斯腾非常注重企业文化的建设，提倡“以人为本”的人才理念，关注员工的持续成长，倡导正能量，形成“勤奋，忠诚，热情，向上”的企业文化。

  素质是人的品质、能力、素养的总称，企业员工的职业素质是影响企业管理与发展的重要因素。高素质的人才，不在于经验的长久，而在于长久的经验培育出来的能力。提升员工素质是揭示各个方面及竞争力的利器。员工个人不仅可以参加企业组织的各种培训，还主动积极的进行自我学习与提高，不断的修炼自我，提高自身的职业素质，从而达到与时俱进，增强竞争力。

  和谐“家”文化

  公司提倡和谐“家”文化，致力于为员工提供良好的办公环境、营造轻松舒适的办公氛围，公司在对员工关怀上下足了工夫，让每一位企业员工真正感受企业文化的力量。”威斯腾管理委员会委员如是表示。一个好的公司，不能仅仅只注重品牌的打造，更要重视人才、重视技术、重视企业文化建设。这就是一个富有朝气，活力的威斯腾生物！