珀金埃尔默发布新品E3连接酶VHL结合试剂盒
点击次数：2438 发布日期：2022-3-4
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VHL（von Hippel-Lindau）基因是一个抑癌基因，位于染色体3q25-26，编码含有213氨基酸的VHL蛋白。该蛋白参与许多生物过程，与血管生成、细胞生长或细胞存活的调节密切相关。以及VHL蛋白作为E3泛素连接酶复合体的组成成分，通过泛素化途径参与缺氧诱导因子HIF等靶蛋白的降解，因而受到蛋白降解靶向嵌合体（PROteolysis TArgeting Chimeria, PROTAC）技术的关注，作为靶点来开发PROTAC小分子药物。
Distribution of the small-molecule ligands-based PROTACs
截止到目前VHL和CRBN是两个最受关注的E3连接酶，发现新的E3连接酶配体或可改善蛋白酶体依赖性降解的选择性。现PerkinElmer推出新品HTRF® Human VHL Binding Kit试剂盒，用来筛选可以和VHL特异性结合的化合物。
实验原理
该实验采用的竞争法模型，当化合物（VHL配体或PROTAC化合物）可以与VHL结合，就会和标记了荧光受体的配体（red ligand）竞争结合VHL蛋白，HTRF信号就会下降。
操作步骤
数据验证
验证一：使用两种文献已报道的VHL配体（VH-032和VH-298 ）进行验证，结果如图。
验证二：使用四种VHL-based PROTAC化合物CRBN-6-5-5-VHL、TBK1、CM11和ARV-771进行验证，结果与文献报道相一致。
验证三：DMSO耐受度
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