 |
基因敲除小鼠是指通过基因工程的方法使小鼠体内某种或全部基因功能缺失的小鼠模型
|
|||||||||||||||||
| [发表评论] [本类其他服务] [本类其他服务商] | ||||||||||||||||||
| 服务商： 赛业（苏州）生物科技有限公司 | 查看该公司所有服务 >> |
完全性基因敲除（Knockout，KO）小鼠，也叫全身性基因敲除小鼠，是通过基因敲除技术，把需要敲除目的基因的所有外显子或几个重要的外显子或者功能区域敲除掉，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。
TurboKnockout®完全性基因敲除小鼠
TurboKnockout®完全性基因敲除小鼠是通过TurboKnockout®技术把需要敲除目的基因的所有外显子或几个重要的外显子或功能区域敲除掉，使得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因。建立在传统基因打靶技术之上的TurboKnockout®基因编辑技术不仅具有传统ES打靶技术成熟、修饰准确、效果稳定等优点，更是使得传统ES打靶技术减少两代繁育时间，周期快至4个月，是大片段基因修饰等复杂模型的常用构建方式。
TurboKnockout®完全性基因敲除小鼠的建系原则与流程：
1. 去除抗性基因Neo：选择阳性TurboKnockout®小鼠与野⽣型小鼠杂交，自删除Neo，获得去除打靶载体中的Neo基因的F1代杂合子KO（+/-）小鼠。
2. 再挑选⼀对F1代杂合子KO小鼠（+/-）进行自交，通过PCR鉴定筛选得到基因敲除的F2纯合子KO小鼠（-/-）。
CRISPR-Pro完全性基因敲除小鼠
CRISPR-Pro完全性基因敲除小鼠主要采用靶基因设计和构建gRNA与Cas表达质粒，造成目的基因的功能区域被敲除，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。CRISPR-Pro技术沿用核酸酶介导的基因修饰技术体系，采用独特的受精卵处理方式使受精卵偏好同源重组修复路径，进而提高同源重组效率，制作周期快至3个月。
CRISPR-Pro完全性基因敲除小鼠的建系原则与流程：
1. 通过针对一个或多个靶基因或靶基因不同位点设计、构建相应的gRNA质粒，体外转录为RNA后，与Cas蛋白和mRNA⼀起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代阳性小鼠。
2. F0代阳性小鼠与野⽣型小鼠进行交配，获得PCR和测序鉴定阳性的F1代杂合子小鼠。
3. 选择来自同⼀只F0代小鼠，基因型⼀致的F1代杂合小鼠，达到性成熟后互配，可获得F2代小鼠。对获得的F2代小鼠进行PCR及测序鉴定，理论上，F2代小鼠中25%为纯合子，50%为杂合子，25%为野生小鼠。
手机版：基因敲除小鼠
Copyright(C) 1998-2026 生物器材网 电话：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com